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產(chǎn)品選擇指南

技術(shù)服務(wù)信息

當(dāng)前位置：首頁> 產(chǎn)品選擇指南 > cDNA合成 & 克隆 > Site-Directed Mutagenesis > 定點(diǎn)突變試劑盒TaKaRa MutanBEST Kit
定點(diǎn)突變試劑盒TaKaRa MutanBEST Kit
品牌 Code No. 產(chǎn)品名稱 包裝量 價(jià)格（元） 說明書 數(shù)量
Takara R401 TaKaRa MutanBEST Kit 20 Rxns ￥1,315
 
■ 制品內(nèi)容 (20 次量)
Pyrobest DNA Polymerase (5 U/μl) 15 μl
10×Pyrobest Buffer II 200 μl
dNTP Mixture (2.5 mM each) 180 μl
10×Blunting Kination Buffer 50 μl
Blunting Kination Enzyme Mix 25 μl
Ligation Solution I* 150 μl
 
* Ligation Solution I 即為Ligation Kit Ver.2.1 的一種組份。
 
 
■ 制品說明
本制品是利用PCR技術(shù)進(jìn)行定點(diǎn)突變操作的試劑盒。其原理是利用導(dǎo)入變異點(diǎn)的引物進(jìn)行PCR反應(yīng)后，對PCR產(chǎn)物進(jìn)行末端平滑化及5’磷酸 (P) 化處理，再用高效連接試劑Ligation Solution I進(jìn)行自身連接 (環(huán)化反應(yīng))，然后轉(zhuǎn)化、提取突變體DNA。
本試劑盒的原理十分簡單，但Taq酶在PCR過程中的錯(cuò)配率限制了這一技術(shù)的應(yīng)用?，F(xiàn)在，Takara的Pyrobest DNA Polymerase使這一技術(shù)得到了很好的發(fā)揮。Pyrobest DNA Polymerase不僅具有很高的保真性（Fidelity），并且和TaKaRa Taq具有同樣的擴(kuò)增效率。與其他突變試劑盒相比，本試劑盒的特點(diǎn)是操作方便、簡單，只需一天時(shí)間便可完成整個(gè)操作，并且不受載體、宿主菌的限制。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ TaKaRa MutanBEST Kit原理
試劑盒原理見下圖，全套操作約需5小時(shí)，簡單說明如下。
1. 設(shè)計(jì)一對5’端鄰接，3’端方向相反的引物用以導(dǎo)入變異點(diǎn)。
2. 進(jìn)行PCR擴(kuò)增 (使用高保真DNA聚合酶Pyrobest DNA Polymerase)。
3. PCR片段的末端平滑及5’末端磷酸化反應(yīng) (在同一反應(yīng)體系內(nèi)進(jìn)行，反應(yīng)只需10分鐘)。
4. 自身連接反應(yīng) (使用本試劑盒中的DNA高效連接液Ligation Solution I，連接反應(yīng)只需30 分鐘至1小時(shí))。
5. 質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化，挑選變異體。
 
 
■ 注意事項(xiàng)
1. 當(dāng)載體與插入的DNA片段的總長度小于5 kb時(shí)，使用本試劑盒較為合適；如果載體與插入DNA 片段長度太長時(shí)，不推薦使用本試劑盒。
2. PCR反應(yīng)后的DNA片段應(yīng)進(jìn)行切膠回收純化，然后再進(jìn)行自身連接反應(yīng)，這樣可以提高突變成功率。
3. Ligation Solution I請于冰中融解，使用前混勻。應(yīng)避免多次反復(fù)凍融。
4. 連接轉(zhuǎn)化效率低時(shí)，請?jiān)囉孟率龇椒ㄟM(jìn)行改進(jìn)。
① 確認(rèn)感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
② 延長連接反應(yīng)時(shí)間至過夜反應(yīng)。
 
 

頁面更新：2024-01-25 14:31:24

關(guān)聯(lián)信息

參考文獻(xiàn)

TaKaRa MutanBEST Kit的使用文獻(xiàn)

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