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產(chǎn)品選擇指南

技術(shù)服務(wù)信息

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感受態(tài)細(xì)胞E.coli HST04 dam-/dcm- Competent Cells
品牌 Code No. 產(chǎn)品名稱 包裝量 價(jià)格（元） 說明書 數(shù)量
Takara 9129 E.coli HST04 dam-/dcm- Competent Cells 100 μl × 10 ￥651
 
■ 制品內(nèi)容
E.coli HST04 dam-/dcm- Competent Cells 100 μl × 10
pUC19 plasmid (0.1 ng/μl) 10 μl
SOC Medium* 1 ml × 10
*SOC Medium:      2%   Ttryptone
 0.5%   Yeast extract
 10 mM   NaCl
 2.5 mM   KCl
  10 mM   MgSO4
10 mM   MgCl2
 20 mM   Glucose
 
■ 制品說明
Takara公司在Hanahan's method基礎(chǔ)上進(jìn)行了改良，制備出E. coli HST04 dam-/dcm- Competent Cells，當(dāng)用1 ng pUC19轉(zhuǎn)化100 μl細(xì)胞時(shí)，轉(zhuǎn)化效率＞1×106 cfu/μg。
E.coli HST04 dam-/dcm-是甲基化基因dam、dcm缺失的菌株，使DNA不被甲基化。使用本菌株轉(zhuǎn)化所得到的質(zhì)粒，可以被對(duì)dam、dcm甲基化敏感的限制酶切割。
另外，dam、recA雙重突變的菌株是致死的，本菌株為recA+菌株。因此，易與帶有同源序列的外源DNA發(fā)生重組。本制品只適用于轉(zhuǎn)化已經(jīng)構(gòu)筑好的質(zhì)粒, 而不適用于常規(guī)的克隆轉(zhuǎn)化。
 
■ 細(xì)胞濃度
1-2×109 bacteria/ml
 
■ Genotype
E. coli HST04 dam-/dcm-： F-, ara, △(lac-proAB) [Φ80dlacZ△M15], rpsL( str), thi, △(mrr-hsdRMS-mcrBC), △mcrA, dam, dcm
 
■ 保存
-80℃。
注意： 如果不在-80℃下保存，轉(zhuǎn)化效率將會(huì)降低。此時(shí)，在使用前，請(qǐng)使用附帶的pUC19 對(duì)照質(zhì)粒來確認(rèn)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。不能液氮保存。
 
■ 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
轉(zhuǎn)入1 ng 的pUC19 plasmid，涂于含有ampicillin的L-plate進(jìn)行篩選。
轉(zhuǎn)化效率 : >1 x 106 colonies/μg pUC19 plasmid
 
■ 注意事項(xiàng)
1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80℃冷凍取出后請(qǐng)立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。
2. 可使用1.5 ml microcentrifuge tubes代替14 ml 圓底 tubes (CORNING Code No. 352059 或 352057,等)，但效率可能會(huì)降低。
3. 當(dāng)使用100 μl感受態(tài)細(xì)胞時(shí)，加入的高純度質(zhì)粒DNA不要超過10 ng。否則轉(zhuǎn)化效率會(huì)降低。
4. 當(dāng)改變感受態(tài)細(xì)胞使用體積或tube類型時(shí)，適當(dāng)調(diào)整反應(yīng)條件。例如，當(dāng)使用1.5 ml microcentrifuge tubes時(shí)，42℃放置60秒而不是45秒。
5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)化效率可能會(huì)降低。
  ·L-broth：10 g Tryptone, 5 g Yeast extract, 5 g NaCl，用1 N NaOH調(diào)整pH到7.5，使體系終體積為1 L，高壓滅菌。
  ·φ b-broth：5 g Yeast extract, 20 g Tryptone, 5 g MaSO4·7H2O，用1 N KOH調(diào)整pH到7.5，使體系終體積為1 L，高壓滅菌。
  ·L-plates： 10 g Tryptone，5 g Yeast extract，5 g NaCl/1 L water, 使用1 N NaOH調(diào)整pH到7.5，添加agar到1.5%，使體系終體積為1 L，高壓滅菌。
6. 不建議將解凍的感受態(tài)細(xì)胞再次冷凍保存。但是，如果再次凍結(jié)不可避免，將細(xì)胞置于干冰/乙醇中迅速冷凍，置于-80℃保存。但是，轉(zhuǎn)化效率可能會(huì)降低至少一個(gè)數(shù)量級(jí)。
 
 

頁面更新：2024-01-31 15:21:01

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