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■ 制品說明 | |||||||||||||
pAUR135 DNA是一種穿梭載體,可以利用載體本身的DNA序列將釀酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae) 轉化子中的載體部分序列包括選擇標記AUR1-C基因去除。選擇標記被去除的克隆篩選更容易且高效。所以,pAUR135載體可以反復轉化。含有AUR1-C基因的載體在酵母細胞中具有Aureobasidin A (AbA)抗性和GAL10啟動子調控的GIN11M86 DNA。GIN11M86基因的過表達可以抑制宿主細胞的生長。大部分因為pAUR135存在而具有AbA抗性的轉化子在轉移到半乳糖培養(yǎng)基中培養(yǎng)時,GIN11M86基因可以在GAL10啟動子和半乳糖作用下過表達,從而表現出致死顯型。但是只有那些低效重組獲得的pAUR135載體被去除的克隆可以優(yōu)先在半乳糖培養(yǎng)基中生長。這些能在含有半乳糖的培養(yǎng)基中生長的克隆是包含目的表型的克隆和回復原狀的克隆,是AbA敏感的克隆。所以pAUR135可以對這些克隆再次轉化。pAUR135能夠有效地在酵母中導入突變和破壞基因功能。假如工業(yè)酵母菌株發(fā)生了退變,應用pAUR135可以減少不必要DNA序列引起的麻煩。 | |||||||||||||
■ 保存 | |||||||||||||
-20℃。 | |||||||||||||
■ 鏈長 | |||||||||||||
6,074 bp | |||||||||||||
■ 制備 | |||||||||||||
CsCl-EtBr 超離心方法制備。 | |||||||||||||
■ 注意 | |||||||||||||
1. 在pAUR135中進行選擇標記去除主要依靠GIN11M86的過表達,而GIN11M86的過表達受半乳糖誘導的GAL10啟動子控制。 因此,有效的標記去除需要宿主菌對半乳糖的消化作用,實驗前要事先確認宿主的半乳糖營養(yǎng)性后再使用本系統。 |
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■ pAUR135載體圖譜 | |||||||||||||
頁面更新:2024-02-29 10:46:43