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產品選擇指南

技術服務信息

酵母菌穿梭載體pAUR135 DNA
品牌 Code No. 產品名稱 包裝量 價格(元) 說明書 數量
Takara 3604 pAUR135 DNA 20 μg ¥2,063
 
□ 濃度  
     0.5 μg/μl  
□ 貯存溶液  
     Tris-HCl (pH 8.0) 10 mM
     EDTA 1 mM
   
 
■ 制品說明
pAUR135 DNA是一種穿梭載體,可以利用載體本身的DNA序列將釀酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae) 轉化子中的載體部分序列包括選擇標記AUR1-C基因去除。選擇標記被去除的克隆篩選更容易且高效。所以,pAUR135載體可以反復轉化。含有AUR1-C基因的載體在酵母細胞中具有Aureobasidin A (AbA)抗性和GAL10啟動子調控的GIN11M86 DNA。GIN11M86基因的過表達可以抑制宿主細胞的生長。大部分因為pAUR135存在而具有AbA抗性的轉化子在轉移到半乳糖培養(yǎng)基中培養(yǎng)時,GIN11M86基因可以在GAL10啟動子和半乳糖作用下過表達,從而表現出致死顯型。但是只有那些低效重組獲得的pAUR135載體被去除的克隆可以優(yōu)先在半乳糖培養(yǎng)基中生長。這些能在含有半乳糖的培養(yǎng)基中生長的克隆是包含目的表型的克隆和回復原狀的克隆,是AbA敏感的克隆。所以pAUR135可以對這些克隆再次轉化。pAUR135能夠有效地在酵母中導入突變和破壞基因功能。假如工業(yè)酵母菌株發(fā)生了退變,應用pAUR135可以減少不必要DNA序列引起的麻煩。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ 鏈長
6,074 bp
 
■ 制備
CsCl-EtBr 超離心方法制備。
 
■ 注意

1. 在pAUR135中進行選擇標記去除主要依靠GIN11M86的過表達,而GIN11M86的過表達受半乳糖誘導的GAL10啟動子控制。

因此,有效的標記去除需要宿主菌對半乳糖的消化作用,實驗前要事先確認宿主的半乳糖營養(yǎng)性后再使用本系統。
2. 對于標記去除的克隆,目的表型的比例受導入突變或缺失的位置的影響很大。

 
pAUR135載體圖譜
 
 

頁面更新:2024-02-29 10:46:43

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