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| 慢病毒純化 |
Lenti-X Maxi Purification Kit可從原始的培養(yǎng)上清液中純化出高純度和高產(chǎn)量的病毒。其基于重力流柱的實(shí)驗(yàn)操作，快速、簡單、有效并且優(yōu)于基于過濾器的純化系統(tǒng)，后者會(huì)損壞易于損傷的慢病毒顆粒，從而降低產(chǎn)量。重力流柱會(huì)輕柔固定培養(yǎng)上清液中的病毒顆粒，未被結(jié)合的物質(zhì)則會(huì)在洗滌步驟穿透柱子流出。
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為什么要純化慢病毒？
慢病毒純化能去除可能對轉(zhuǎn)導(dǎo)實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生不利影響的細(xì)胞污染物。原始的培養(yǎng)上清液中包含殘留的質(zhì)粒DNA，不明感染和轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制劑，細(xì)胞和血清蛋白質(zhì)，以及具有高度免疫原性的病毒蛋白質(zhì)、核酸和病毒片段。在使用慢病毒作用于敏感靶細(xì)胞或體內(nèi)應(yīng)用之前，有必要通過純化慢病毒來去除這些污染物。
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簡便的操作流程。
我們的慢病毒純化柱是即用型預(yù)裝柱，只需將10X結(jié)合緩沖液加入到上清液樣品（9-45 ml）中，然后再將混合物添加至純化柱即可。樣品和緩沖液借助重力穿過樹脂，就像是基于純化柱的質(zhì)粒制備。在兩次洗滌純化柱的過程中，雜質(zhì)被去除掉了，純化后的慢病毒回收在3 ml洗脫緩沖液中。
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防止假轉(zhuǎn)導(dǎo)。
使用純化后的慢病毒儲(chǔ)液還可以防止假轉(zhuǎn)導(dǎo)，因?yàn)樵诟腥镜倪^程中，原始病毒上清液中高水平重組蛋白質(zhì)會(huì)被轉(zhuǎn)移至靶細(xì)胞中。而靶細(xì)胞假轉(zhuǎn)導(dǎo)會(huì)掩蓋慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)所預(yù)期的de novo表達(dá)。
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更高的產(chǎn)量和純度。
溫和的純化程序是維持病毒感染性和產(chǎn)生60-80％優(yōu)良慢病毒產(chǎn)量的關(guān)鍵所在?；陉庪x子交換的膜系統(tǒng)回收率要低得多，通常低于20％。而與基于過濾器的系統(tǒng)相比，Lenti-X純化柱獲得的病毒純度更高。事實(shí)上，純化后的Lenti-X樣品中可檢測到的蛋白質(zhì)含量很低，而基于過濾器純化的病毒液則含有與病毒共同純化出來的高水平外源蛋白質(zhì)。
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| ■ Overview |
· 與其他純化技術(shù)相比，獲得的純度和產(chǎn)量更高
· 濃縮病毒至多10倍
· 簡便而溫和的重力流操作流程
· 專用收集架可與試劑盒 (Code No. 631245)一同購買，也可單獨(dú)購買 (Code No. 631246)
· 實(shí)現(xiàn)更高效、更一致的慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)，收獲更健康的靶細(xì)胞
· 有效去除轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制劑和細(xì)胞毒性污染物
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| ■ 實(shí)驗(yàn)例 |
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圖1. 收集架L。組裝后，這個(gè)收集架可安全牢固地容納三根色譜柱（例如慢病毒純化柱）和三根收集管（50 ml錐形管）。
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圖2. 使用Clontech慢病毒純化試劑盒可獲得高產(chǎn)量和高純度。使用我們的高滴度慢病毒包裝系統(tǒng)制備并純化慢病毒。Panel A. 為了確定病毒產(chǎn)量，通過qRT-PCR（RNA拷貝數(shù)）或流式細(xì)胞儀/熒光（IFU）測定純化前和純化后的慢病毒滴度，展示數(shù)據(jù)為七組實(shí)驗(yàn)的平均值。Panel B. 使用Lenti-X或基于過濾器的純化系統(tǒng)（Vendor M和Vendor S）制備等量的純化后慢病毒（1×105 IFU）進(jìn)行SDS-PAGE和銀染。與其它兩種基于過濾器系統(tǒng)所制備的樣品相比，在相同IFU的情況下Lenti-X樣品含有明顯更少的污染蛋白質(zhì)。
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京公網(wǎng)安備 110114000405號(hào)
/慢病毒包裝系統(tǒng)（灰）.png)
/293T包裝細(xì)胞（灰）.png)
/慢病毒滴度測定（灰）.png)
/慢病毒濃縮（灰）.png)
/慢病毒純化（黃）.png)
/轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)（灰）.png)
/整合位點(diǎn)檢測（灰）.png)