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產(chǎn)品選擇指南

技術(shù)服務(wù)信息

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平末端連接試劑盒Blunting Kination Ligation (BKL) Kit
品牌 Code No. 產(chǎn)品名稱 包裝量 價(jià)格（元） 說明書 數(shù)量
Takara 6127A Blunting Kination Ligation (BKL) Kit 24 Rxns ￥1,220
 
■ 制品內(nèi)容 (24 次量)
10X Blunting Kination Buffer 50 μl
Blunting Kination Enzyme Mix 25 μl
Ligation Solution I*1 150 μl
Control Vector (pUC118-Hinc II /BAP; 50 ng/μl) 5 μl
Control Insert (200 ng/μl)*2 10 μl
ddH2O 500 μl
 
*1 Ligation Solution I 即為DNA Ligation Kit Ver.2.1的一種組份。
*2 以λ DNA為模板，通過TaKaRa Taq反應(yīng)擴(kuò)增的500 bp的PCR片段。
 
■ 制品說明
Blunting Kination Ligation (BKL) Kit是一種能使DNA片段的末端平滑化、5’端的磷酸化、DNA片段和載體的連接等諸反應(yīng)高效快速完成的試劑盒。使用本試劑盒時(shí)，DNA片段的末端平滑化反應(yīng)和5’端的磷酸化反應(yīng)可在一個(gè)反應(yīng)體系中同時(shí)進(jìn)行，反應(yīng)時(shí)間只需10分鐘。此外，本試劑盒中還含有高效的DNA連接液，可在短時(shí)間內(nèi)完成連接反應(yīng)。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ Takara BKL Kit原理
 
 
■ 注意事項(xiàng)
1. Ligation Solution I 請(qǐng)于冰中融解，使用前混勻。應(yīng)避免多次反復(fù)凍融。
2. 連接轉(zhuǎn)化效率低時(shí)，請(qǐng)?jiān)囉孟率龇椒ㄟM(jìn)行改進(jìn)。
① 確認(rèn)感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
② 延長(zhǎng)連接反應(yīng)時(shí)間至過夜反應(yīng)。
③ 連接反應(yīng)后向溶液中加入NaCl使其終濃度為500 mM，再做細(xì)菌轉(zhuǎn)化。
如果以上操作仍不能改善連接效率，則需對(duì)連接后的DNA進(jìn)行純化。
3. 當(dāng)使用具有lacZ基因的載體克隆短鏈DNA片段時(shí)，有時(shí)即使插入了DNA片段也會(huì)有不出現(xiàn)停止密碼或者讀框不改變的情況發(fā)生，在顏色選擇培養(yǎng)基上形成淡藍(lán)色的單菌落。
4. 短鏈DNA克隆時(shí)，有時(shí)會(huì)有插入內(nèi)含數(shù)個(gè)串聯(lián)DNA片段的克隆體出現(xiàn)。
5. 如果PCR反應(yīng)過程中需要加入礦物油，則要注意勿將其帶入后面的反應(yīng)液中。
6. 帶有磷酸基的3’凹陷末端的DNA片段無法使用本試劑盒進(jìn)行末端平滑化反應(yīng)。
 
 

頁面更新：2024-01-25 14:29:10

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