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■ 制品內(nèi)容 (20 次量) |
T4 DNA Polymerase |
20 μl |
10×Buffer (含dNTP) |
30 μl |
DNA Dilution Buffer |
500 μl |
(100 mM Tris-HCl < pH7.6,16℃> ,5 mM MgCl2) |
Ligation Solution A* |
600 μl × 2 |
Ligation Solution B* |
150 μl |
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*:Ligation solution A和B與DNA Ligation Kit Ver.1 (Code No.:6021) 通用。 |
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■ 制品說(shuō)明 |
DNA Blunting Kit可使具有3’或5’突出末端的DNA平滑化。在T4 DNA Polymerase 5’→3’的聚合酶活性和3’→5’的外切酶活性的作用下,兩種不同形式的粘性末端可被同時(shí)平滑化。再使用本試劑盒中的連接液即可高效地將得到的平末端DNA與平末端載體相連。并且反應(yīng)液不需純化,可以直接用于細(xì)菌轉(zhuǎn)化和體外包裝等。
本試劑盒也可將載體DNA的末端平滑化。經(jīng)平滑化后的載體DNA再進(jìn)行去磷酸化后使用。
很多PCR產(chǎn)物都含有3’-dA末端,因而不能有效連入載體。如果使用本試劑盒將此類(lèi)PCR產(chǎn)物末端平滑化,再根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行磷酸化處理,就可以有效地連入平末端載體。
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■ 保存 |
-20℃。 |
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■ DNA末端平滑化原理 |
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■ 使用注意 |
1. 本試劑盒可使具有去磷酸化的5’突出末端的DNA末端平滑,但不能使磷酸化的3’凹陷末端的DNA末端平滑。在鳥(niǎo)槍法克隆時(shí),應(yīng)注意超聲波分解的DNA片段,可能會(huì)產(chǎn)生具有磷酸化的3’凹陷末端的DNA片段。
2. Ligation Solution A和B置于冰中融解,使用前快速混勻。
3. 做細(xì)菌轉(zhuǎn)化時(shí),連接液不需要做苯酚抽提便可直接使用。如果有必要濃縮,可用乙醇沉淀法精制DNA。 |
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