欧美成 人版在线_久久免视看国产_亚洲成l人在线观看线路_久久96热在精品国产网站

我們使用cookie改善您的瀏覽體驗(yàn)并提供有意義的內(nèi)容。請(qǐng)閱讀我們的cookie協(xié)議
收藏我們 在線(xiàn)訂購(gòu) CoA查詢(xún)
     

機(jī)構(gòu)用戶(hù)解決方案

產(chǎn)品選擇指南

技術(shù)服務(wù)信息

當(dāng)前位置：首頁(yè)> 產(chǎn)品選擇指南 > cDNA合成 & 克隆 > Vector（克隆用） > 平末端PCR產(chǎn)物克隆用載體pSIMPLE-19 EcoR V/BAP Vector
平末端PCR產(chǎn)物克隆用載體pSIMPLE-19 EcoR V/BAP Vector
品牌 Code No. 產(chǎn)品名稱(chēng) 包裝量 價(jià)格（元） 說(shuō)明書(shū) 數(shù)量
Takara 6012 pSIMPLE-19 EcoR V/BAP Vector 1.0 μg ￥468
 
■ 制品內(nèi)容
pSIMPLE-19 EcoR V/BAP Vector (50 ng/μl) 20 μl × 1 支
Control Insert 2 (50 ng/μl)* 10 μl × 1 支
   
* 本DNA片段與EcoR V酶切載體連接后，可以使用EcoR V切下DNA片段。
 
■ 制品說(shuō)明
pSIMPLE-19 EcoR V/BAP Vector是一種高效克隆末端平滑PCR產(chǎn)物的專(zhuān)用載體。本載體由pUC19載體改建而成，它消除了pUC19載體上的多克隆酶切位點(diǎn)，再在多克隆酶切位點(diǎn)處導(dǎo)入了EcoR V酶切位點(diǎn)，使用EcoR V將其切成末端平滑的線(xiàn)性DNA后，進(jìn)行了5′末端的去磷酸化處理，以避免克隆DNA片段時(shí)產(chǎn)生大量載體自連現(xiàn)象。
本載體盡管消除了LacZ基因上的多克隆酶切位點(diǎn)，但不影響 β-半乳糖苷酶的正常表達(dá)，PCR擴(kuò)增片段克隆于載體后仍可以利用α-互補(bǔ)性進(jìn)行藍(lán)白菌落的篩選，挑選陽(yáng)性克隆。
有很多高保真DNA聚合酶，如：Takara PrimeSTAR HS、Pyrobest、KOD、Pfx、Pfu等，其擴(kuò)增的DNA片段為平滑末端，可以方便使用本載體進(jìn)行DNA克隆。由于本載體的5’ 末端進(jìn)行了去磷酸化處理，如果PCR擴(kuò)增片段的5’ 末端不帶磷酸基團(tuán)時(shí)，應(yīng)對(duì)其進(jìn)行5’ 末端磷酸化處理后再使用本載體進(jìn)行DNA克隆。
由于本載體上消除了多克隆酶切位點(diǎn)，當(dāng)PCR產(chǎn)物使用本載體進(jìn)行DNA克隆時(shí)，將無(wú)法使用載體上的限制酶切下，需要在PCR擴(kuò)增引物上導(dǎo)入合適的酶切位點(diǎn)。此時(shí)如果使用PCR擴(kuò)增引物導(dǎo)入的酶切位點(diǎn)進(jìn)行DNA酶切時(shí)，酶切反應(yīng)將不會(huì)受到載體上其它多克隆酶切位點(diǎn)上的限制酶影響，可以大大提高酶切效率，增加亞克隆成功率。
本制品的β-半乳糖苷酶的表達(dá)活性高，菌落顯示藍(lán)色的時(shí)間短，菌落顯示的藍(lán)色深。因此，克隆后容易進(jìn)行克隆體的藍(lán)白篩選。
本載體同樣可以用于末端平滑的其他DNA片段的克隆。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ 純度
Control Insert2經(jīng)克隆后的白色菌落中，有90%以上含有Insert DNA片段。
 
■ 用途
1. 平滑末端PCR產(chǎn)物的克隆。
2. 其他平滑末端DNA片段的克隆。
3. 對(duì)克隆后的DNA片段使用BcaBEST Sequencing Primers、M13 Primers進(jìn)行DNA測(cè)序。
 
■ pSIMPLE-19 EcoR V/BAP Vector的結(jié)構(gòu)
 
■ 注意事項(xiàng)
1. 由于載體上的多克隆酶切位點(diǎn)被破壞，所以使用本載體克隆PCR產(chǎn)物時(shí)，注意應(yīng)在PCR引物上設(shè)計(jì)導(dǎo)入酶切位點(diǎn)，否則將會(huì)難以切下DNA片段進(jìn)行其它亞克隆實(shí)驗(yàn)。
2. 為了避免載體自連，本載體進(jìn)行了去磷酸化處理，因此Insert DNA片段的5′端必須保證帶有磷酸基團(tuán)，否則無(wú)法進(jìn)行連接。Takara PrimeSTAR HS、Pyrobest、KOD、Pfx、Pfu 等DNA聚合酶擴(kuò)增的PCR片段須經(jīng)過(guò)磷酸化處理后才能進(jìn)行連接反應(yīng)(引物的5′端進(jìn)行磷酸化標(biāo)記時(shí)除外)。
3. 克隆時(shí)使用的Insert DNA片段 (PCR產(chǎn)物) 建議進(jìn)行切膠回收純化，否則PCR產(chǎn)物中的短片段DNA (甚至是電泳也無(wú)法確認(rèn)的非特異性小片段)、殘存引物等雜質(zhì)都會(huì)影響克隆效率。
4. 按照本實(shí)驗(yàn)操作進(jìn)行連接后，直接進(jìn)行轉(zhuǎn)化時(shí)的連接液不要超過(guò)20 μl。當(dāng)要轉(zhuǎn)化的DNA量較大或準(zhǔn)備進(jìn)行電轉(zhuǎn)化時(shí)，需對(duì)連接液進(jìn)行乙醇沉淀，純化DNA后再進(jìn)行轉(zhuǎn)化。進(jìn)行乙醇沉淀時(shí)使用Dr. GenTLE Precipitation Carrier (Code No.: 9094) 可以提高DNA的回收率。
5. 連接反應(yīng)請(qǐng)?jiān)?5℃以下進(jìn)行，溫度升高 (>26℃) 較難形成環(huán)狀DNA。連接效率偏低時(shí)，可適當(dāng)延長(zhǎng)連接反應(yīng)時(shí)間至數(shù)小時(shí)。
6. 本制品來(lái)源于pUC19載體，因此，適合pUC19載體的感受態(tài)細(xì)胞都可以使用，如: JM109等。
 
 

頁(yè)面更新：2024-01-25 16:07:10

瀏覽此產(chǎn)品的客戶(hù)還對(duì)以下信息感興趣