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產(chǎn)品選擇指南

技術(shù)服務(wù)信息

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一步法RT-PCR試劑盒TaKaRa One Step RNA PCR Kit (AMV)
品牌 Code No. 產(chǎn)品名稱 包裝量 價(jià)格（元） 說(shuō)明書 數(shù)量
Takara RR024A TaKaRa One Step RNA PCR Kit (AMV) 50 Rxns ￥1,872
Takara RR024B (A × 2) TaKaRa One Step RNA PCR Kit (AMV) 50 Rxns × 2 ￥3,369
無(wú)標(biāo)題文檔
※ 上表中產(chǎn)品貨期不定，請(qǐng)您在下單前咨詢當(dāng)?shù)卮砩獭?/STRONG>
 
 
RNA提取試劑 RT-pcr試劑 DNA Markers PCR儀器
 
 
■ 制品內(nèi)容 (Code No.: RR024A : 50 次量)
AMV Reverse Transcriptase XL*1 (5 U/μl) 50 μl
RNase Free dH2O 1 ml × 2 支
RNase Inhibitor (40 U/μl) 50 μl
AMV-Optimized Taq (5 U/μl) 50 μl
10X One Step RNA PCR Buffer 250 μl
dNTP Mixture (各10 mM) 250 μl
MgCl2 (25 mM) 500 μl
Control F-1 Primer (20 μM)*1
(Positive Control RNA用上游引物)		 25 μl
Control R-1 Primer (20 μM)*1
(Positive Control RNA用下游引物)		 25 μl
Positive Control RNA*3 (2×105 copies/μl)
(poly A+ RNA transcribed from pSPTet3 plasmid)		 25 μl
   
*1：各種引物序列
引物名稱 各引物序列
Control F-1 Primer 5′-CTGCTCGCTTCGCTACTTGGA-3′
Control R-1 Primer 5′-CGGCACCTGTCCTACGAGTTG-3′
 
*2：本試劑盒中的Control RNA是以pSPTet3質(zhì)粒 (質(zhì)粒中的SP6啟動(dòng)子下游插入長(zhǎng)約1.4 kb的pBR322來(lái)源的DNA片段，其DNA片段上含有抗四環(huán)素基因) 為模板由SP6 RNA聚合酶經(jīng)體外轉(zhuǎn)錄而得到的。
 
圖1. Positive Control RNA：進(jìn)行Control實(shí)驗(yàn)時(shí)所能擴(kuò)增的DNA片段
 
 
■ 制品說(shuō)明
PCR (Polymerase Chain Reaction；聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)) 是一種體外擴(kuò)增DNA的簡(jiǎn)單而有效的方法。雖然原理上PCR法是擴(kuò)增DNA，RNA不能直接被擴(kuò)增，但是經(jīng)過(guò)反轉(zhuǎn)錄酶的作用把RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA后，PCR法便可應(yīng)用于RNA的解析了。目前，此方法已廣泛應(yīng)用于RNA的構(gòu)造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表達(dá)解析等多種領(lǐng)域。
本試劑盒采用了一步反應(yīng)法 (One Step法) 完成RT-PCR反應(yīng)。RNA→cDNA→PCR反應(yīng)操作在同一反應(yīng)體系中進(jìn)行，反應(yīng)中途不需添加任何試劑，就可以完成由AMV (Avian Myeloblastosis Virus) 由來(lái)的反轉(zhuǎn)錄酶從RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，再由AMV-Optimized Taq (根據(jù)LA PCR技術(shù)研制) 擴(kuò)增cDNA的全部反應(yīng)。
常規(guī)RT-PCR試劑盒采用2 step PCR進(jìn)行連續(xù)反應(yīng)，并分別配制反應(yīng)液，這些操作增加了污染的可能性，而本試劑盒可降低污染，并且提供的AMV-Optimized Taq可用于LA PCR。本試劑盒中含有進(jìn)行One Step法RT-PCR反應(yīng)用的全部試劑，可以簡(jiǎn)便而有效地對(duì)RNA進(jìn)行擴(kuò)增分析。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ One Step RT- PCR的原理
TaKaRa One Step RNA PCR Kit (AMV) 可在同一反應(yīng)管中完成由AMV 反轉(zhuǎn)錄酶從RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，再使用AMV-Optimized Taq擴(kuò)增此cDNA的RT-PCR反應(yīng)。
圖2. One Step RT-PCR原理圖
 
■ 特點(diǎn)
      RNA模板      適用于所有RNA
      擴(kuò)增片段大小      ～5.6 kb
      反轉(zhuǎn)錄酶     AMV Reverse Transcriptase XL (反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)溫度在42℃～60℃)
      反轉(zhuǎn)錄引物      特異性下游引物(PCR擴(kuò)增反應(yīng)用反義鏈引物)（不可以使用 Oligo dT primer和 Random primer）
      DNA Polymerase      AMV-Optimized Taq
      RNase Inhibitor      Kit中含有
      操作      在同一反應(yīng)管中連續(xù)進(jìn)行 (PCR反應(yīng)前加熱使RTase失活)
 
■ 注意事項(xiàng)
1. 當(dāng)同時(shí)需要進(jìn)行數(shù)次RT-PCR反應(yīng)時(shí)，應(yīng)先配制各種試劑的混合液(Master Mix；其中包括RNase Free dH2O、Buffer、dNTP Mixture、MgCl2 等)，然后再分裝到每個(gè)反應(yīng)管中。這樣，可使所取的試劑體積更準(zhǔn)確，減少試劑損失，避免重復(fù)分取同一試劑。同時(shí)也可以減少實(shí)驗(yàn)操作或?qū)嶒?yàn)之間產(chǎn)生的誤差。
2. 使用RTase、RNase Inhibitor、AMV-Optimized Taq酶等酶類時(shí)，應(yīng)輕輕混勻，避免起泡；分取之前要小心地離心收集到反應(yīng)管底部；由于酶保存液中含有50%的甘油，粘度高，分取時(shí)應(yīng)慢慢吸取。
3. 酶制品應(yīng)在實(shí)驗(yàn)前才從-20℃中取出，使用后也應(yīng)立即放回-20℃中保存。
4. 為了防止Positive Control RNA分解，應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融。有條件的實(shí)驗(yàn)室最好保存于-70℃～-80℃。
5. 分裝試劑時(shí)務(wù)必使用新的槍頭 (Tip)，以防止樣品間污染。
6. 使用本試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)時(shí)必須使用特異性的反轉(zhuǎn)錄引物，Random 9 mers、Oligo dT Primer不能使用。
 
 

頁(yè)面更新：2023-11-01 16:23:45

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