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| ■ 制品內(nèi)容 |
| E.coli HST08 Premium Electro-Cells |
50 μl × 10 |
| pUC19 plasmid ( 10 pg/μl) |
10 μl |
| SOC Medium* |
1 ml × 10 |
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| *SOC Medium: 2% |
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Tryptone |
| 0.5% |
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Yeast extract |
| 10 mM |
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NaCl |
| 2.5 mM |
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KCl |
| 10 mM |
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MgSO4 |
| 10 mM |
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MgCl2 |
| 20 mM |
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Glucose |
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| ■ 制品說明 |
E. coli HST08 Premium Electro-Cells是Takara Bio特別制備的適用于電穿孔法的制品。用高電壓脈沖電流瞬間擊穿細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)膜，從而使外源DNA轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)化方法稱為電穿孔法。通過此種方法制備的感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化效率高、產(chǎn)量大，尤其適合在短時(shí)間內(nèi)將少量樣品轉(zhuǎn)入大腸桿菌內(nèi)。
E.coli HST08是mrr, hsdRMS, mcrBC, mcrA缺失的菌株，這使得其可廣泛應(yīng)用于甲基化質(zhì)粒的制備、基因文庫的制作以及BAC文庫的構(gòu)建。即便轉(zhuǎn)化較大的質(zhì)粒，也可維持較高的轉(zhuǎn)化效率和菌落生長率*。10 kb以上長片段DNA克隆和構(gòu)建基因文庫時(shí)，可與Takara DNA Ligation Kit LONG (Code No. : 6024) 一起使用，效果很好。
*：與其他相同基因型的感受態(tài)細(xì)胞相比較。
對于pUC系列質(zhì)粒，可通過β-半乳糖苷酶的α-互補(bǔ)性，在培養(yǎng)基中添加X-gal進(jìn)行藍(lán)白篩選，以篩選陽性克隆。
X-Gal：5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside |
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| ■ 細(xì)胞濃度 |
| >1×1010 bacteria/ml |
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| ■ Genotype |
| E. coli HST08 Premium： F-, endA1 , supE44 , thi -1 , recA1 , relA1, gyrA96 , phoA , Φ80d lacZ ΔM15,Δ(lacZYA - argF)U169 , Δ(mrr - hsdRMS - mcrBC), ΔmcrA , λ- |
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| ■ 保存 |
-80℃。
注意： -80℃或更低溫度下保存。如果保存溫度不能恒定，轉(zhuǎn)化效率將會降低。請使用附帶的pUC19 對照質(zhì)粒來確認(rèn)保存細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。不能液氮保存。 |
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| ■ 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) |
[1] 轉(zhuǎn)化效率
轉(zhuǎn)入10 pg 的pUC19，涂于含有ampicillin的L-plate進(jìn)行篩選。
轉(zhuǎn)化效率 : >1 x 109 colonies/μg pUC19 plasmid
[2] β-半乳糖苷酶的α-互補(bǔ)性
轉(zhuǎn)化pUC19 DNA時(shí)，含有100 μg/ml ampicilin 和 60 μg/ml X-Gal的L-agar plate上出現(xiàn)藍(lán)色菌落。 |
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| ■ 注意事項(xiàng) |
1. 將Electro-Cells從-80℃取出后請立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。
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| 2. 當(dāng)使用50 μl Electro-Cells時(shí)，高純度樣品DNA添加量不要超過10 ng，否則會降低轉(zhuǎn)化效率。 |
| 3. 當(dāng)使用50 μl Electro-cells時(shí)，DNA溶液添加量不要超過5 μl，否則會降低轉(zhuǎn)化效率。 |
| 4. 當(dāng)改變實(shí)驗(yàn)規(guī)模時(shí)，適當(dāng)改變反應(yīng)條件。 |
| 5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培養(yǎng)基，但轉(zhuǎn)化效率會降低。 |
| ·L-broth：10 g Tryptone, 5 g Yeast extract, 5 g NaCl/1 L water，用1 N NaOH調(diào)整pH7.5左右并高壓滅菌。 |
| ·φ b-broth：5 g Yeast extract, 20 g Tryptone, 5 g MgSO4·7H2O/1 L water，用1 N KOH調(diào)整pH7.5左右并高壓滅菌。 |
| 6. 當(dāng)使用X-Gal時(shí)，按照以下操作進(jìn)行： |
| ·將20 mg /ml X-Gal (溶解于二甲基甲酰胺) 按200-300 μl/100 ml的比例加入到agar media中。 |
| 7. 不建議將解凍的感受態(tài)細(xì)胞再次冷凍保存。但是，如果再次凍結(jié)不可避免，將細(xì)胞置于干冰/乙醇中迅速冷凍，置于-80℃保存。但是，轉(zhuǎn)化效率可能會降低至少一個(gè)數(shù)量級。 |
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京公網(wǎng)安備 110114000405號
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化感受態(tài)細(xì)胞（黃）.png)
