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末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶Terminal Deoxynucleotidyl Transferase
品牌	Code No.	產(chǎn)品名稱(chēng)	包裝量	價(jià)格（元）	說(shuō)明書(shū)	數(shù)量
Takara	2230A	Terminal Deoxynucleotidyl Transferase	300 U	￥269
Takara	2230B (A × 5)	Terminal Deoxynucleotidyl Transferase	300 U × 5	￥1,207

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無(wú)標(biāo)題文檔

■ 制品內(nèi)容

Cloned Terminal Deoxynucleotidyl Transferase (14 U/μl)	300 U
5X Terminal Deoxynucleotidyl Transferase Buffer	1 ml
0.1% × BSA	1 ml

■ 制品說(shuō)明

本酶催化dNTP聚合于單鏈或雙鏈DNA的3’-OH末端的反應(yīng)，該反應(yīng)不需要模板，但引物必須是至少有3個(gè)以上堿基的寡核苷酸。

■ 保存

-20℃。

■ 起源

E. coli carrying the plasmid which encodes the gene of terminal deoxynucleotidyl transferase

■ 活性定義

以DNase處理后的熱變性小牛胸腺DNA為起始物，在37℃ 、pH7.2的條件下，1小時(shí)內(nèi)使1 nmol的 [³H]dTTP摻入酸不溶性沉淀物所需的酶量定義為1個(gè)活性單位 (unit)。

■ 特性

1. 分子量：60,000。
2. 最適pH：7.2。
3. 輔因子：二價(jià)離子Mg²⁺，Mn²⁺或Co²⁺。
4. 底物特異性：核酸類(lèi)似物 (如5-甲基-dCTP，6-O-甲基-dGTP等) 可作為底物。三磷酸雙脫氧胸腺嘧啶和三磷酸蟲(chóng)草菌素為終止物。

■ 用途

1. 通過(guò)Okayama-Berg法給載體或cDNA加上互補(bǔ)同聚尾。
2. 使用dNTP、ddNTP來(lái)標(biāo)記DNA的3’末端。

■ 使用注意

1. 影響反應(yīng)的因素有：添加的堿基種類(lèi) (dATP,dTTP,dCTP,dGTP)，緩沖液中的二價(jià)陽(yáng)離子(Mg²⁺,Mn²⁺,Co²⁺)，DNA末端結(jié)構(gòu)(3’-OH突出末端，平末端，3’-OH凹陷末端)。因此，每個(gè)反應(yīng)都需要摸索最適條件。一般來(lái)說(shuō)，添加dATP和dTTP時(shí)，含有Co²⁺ 的緩沖液是最佳的，而添加dCTP和dGTP時(shí)，含有Mn²⁺ 的緩沖液是最佳的。

2. 對(duì)于長(zhǎng)度為15-40 bp的核酸鏈，如果是3’-OH突出末端，dNTPs與DNA的適合摩爾比是20 : 1，如果是3’-OH凹陷末端，dNTPs與DNA的適合摩爾比是100 : 1。

* CoCl2 緩沖液

100 mM	Sodium cacodylate（pH7.2）
1 mM	CoCl2
0.1 mM	DTT

MnCl2 緩沖液

100 mM	Sodium cacodylate（pH7.2）
2 mM	MnCl2
0.1 mM	DTT

頁(yè)面更新：2024-05-15 13:54:13

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