BAL 31 Nuclease是海洋性細(xì)菌A.espejiana BAL 31在菌體外產(chǎn)生的酶。能以內(nèi)切方式特異性地降解單鏈DNA (活性I),沒有單鏈時也作用于雙鏈DNA (活性II),表現(xiàn)出從DNA兩端同時降解的5’→3’及3’→5’的外切酶活性,最終產(chǎn)物為5’-P單核苷酸。本酶主要有[F]型和[S]型,相對于活性I,[F]型具有相對較高的活性II,[S]型的活性II較低。盡管二者活性不同,但反應(yīng)條件相同,本公司出售的BAL 31 Nuclease主要為[F]型。 |
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■ 保存 |
-20℃。 |
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■ 起源 |
Alteromonas espejiana BAL 31 |
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■ 活性定義 |
以熱變性小牛胸腺DNA為底物,在30℃、pH8.0的條件下,1分鐘內(nèi)生成1 μg酸可溶性物質(zhì)所需要的酶量定義為1個活性單位(unit)。 |
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■ 用途 |
從DNA片段的兩端限定降解。缺失的長度適合于100-1,000個堿基左右。 |
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■ 使用注意 |
1. 本酶表現(xiàn)外切酶活性的最適pH為8.0,反應(yīng)需要Ca2+的存在,通過使用螯合劑可使其不可逆失活。在NaCl濃度為1 M左右時,該酶對于單鏈DNA表現(xiàn)出最大外切活性。相反對于雙鏈DNA,其外切活性則隨著鹽濃度的增加而降低。當(dāng)鹽濃度在100 mM以下時,雙鏈DNA可能發(fā)生隨機(jī)降解。因此,建議在鹽濃度200-600 mM范圍內(nèi)進(jìn)行反應(yīng)。
2. 降解速率取決于堿基序列,因此兩端降解速率不同。 |