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產(chǎn)品選擇指南

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分泌型蛋白質(zhì)表達(dá)系統(tǒng)B. subtilis Secretory Protein Expression System
品牌 Code No. 產(chǎn)品名稱(chēng) 包裝量 價(jià)格（元） 說(shuō)明書(shū) 數(shù)量
Takara 3380 B. subtilis Secretory Protein Expression System 10 Rxns ￥5,157
無(wú)標(biāo)題文檔
 
■ 制品內(nèi)容 (文庫(kù)制作10次量)
SP DNA mixture (0.032 pmol/μl)＊1 45 μl
pBE-S DNA (0.5 μg/μl)＊2 20 μg
B. subtilis RIK1285 (glycerol stock)＊3 100 μl x 2
   
*1：與In-Fusion®克隆系統(tǒng)搭配使用，可編碼來(lái)源于B. subtilis 的173種分泌信號(hào)肽的DNA混合物。
*2：溶于TE buffer(pH8.0)。
*3：Marburg 168 derivative : trpC2, lys1, aprEΔ3, nprR2, nprE18
 
【注意】本制品僅限用于科研目的，凡用于商業(yè)用途，須獲得Takara公司授權(quán)許可。了解詳細(xì)信息以及獲取相關(guān)許可文件，請(qǐng)致電4006518761或郵件聯(lián)絡(luò)service@takarabiomed.com.cn。
 
■ 制品說(shuō)明
使用Bacillus subtilis 作為宿主菌有利于重組蛋白質(zhì)的可溶性和分泌性表達(dá)，尤其適用于含二硫鍵等復(fù)雜結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)表達(dá)。與大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)相比，B. subtilis 表達(dá)的重組蛋白質(zhì)不含內(nèi)毒素。
T. Eggert等人的研究表明，重組蛋白的分泌水平受信號(hào)肽種類(lèi)的影響十分顯著。Takara Bio公司現(xiàn)已開(kāi)發(fā)出一種使用B. subtilis 篩選分泌蛋白有效表達(dá)的系統(tǒng)。該系統(tǒng)能夠從包含173種B. subtilis 來(lái)源的分泌信號(hào)肽的文庫(kù)中，鑒定出適合靶蛋白分泌表達(dá)的信號(hào)肽。但是，由于B. subtilis 的質(zhì)粒拷貝數(shù)非常低，因此很難在B. subtilis 中構(gòu)建質(zhì)粒。本系統(tǒng)使用pBE-S DNA作為E. coli 和B. subtilis 之間的穿梭質(zhì)粒，從而可以在E. coli 中構(gòu)建和傳遞表達(dá)質(zhì)粒。
本系統(tǒng)包括：
SP DNA mixture——B. subtilis 分泌信號(hào)肽的DNA文庫(kù)
B. subtilis / E. coli 穿梭載體pBE-S DNA
B. subtilis strain RIK1285
SP DNA mixture 包含能夠編碼173種B. subtilis分泌信號(hào)肽的DNA片段(用于In-Fusion克隆)。pBE-S DNA載體含有能夠在B. subtilis 中發(fā)揮作用的pUB110來(lái)源的復(fù)制起始位點(diǎn)(pUB ori)和一個(gè)卡那霉素抗性基因(Kanr)，以及能在E.coli 中發(fā)揮作用的pUC來(lái)源的復(fù)制起始位點(diǎn)(CoIE ori)和一個(gè)氨芐青霉素抗性基因(Ampr)。此外，在多克隆位點(diǎn)(MCS)和His-Tag序列的上游，還有一段B. subtilis 來(lái)源的枯草桿菌蛋白酶啟動(dòng)子(aprE promoter)和分泌信號(hào)肽 (aprE SP)序列。含有目的基因的pBE-S DNA載體可使用限制性?xún)?nèi)切酶Mlu I 和Eco52 I線(xiàn)性化，然后通過(guò)Clontech的In-Fusion®克隆方法，就可以替換aprE SP(參見(jiàn)下方質(zhì)粒圖譜)，引入SP DNA mixture中的173種分泌信號(hào)肽的DNA文庫(kù)，這樣就可以為目的蛋白質(zhì)篩選到合適有效的分泌信號(hào)肽。
由于pBE-S DNA載體與E.coli 冷休克表達(dá)系統(tǒng)的pCold 載體 (Code No.: 3360～3365 和 3371)的多克隆位點(diǎn)相同，因此目的基因可以很容易地在這些載體之間轉(zhuǎn)移。試劑盒中提供的宿主菌B. subtilis RIK1285有兩種蛋白酶缺陷，因此適用于目的蛋白質(zhì)的分泌表達(dá)。
 
■ 保存
SP DNA mixture和pBE-S DNA : -20℃
B. subtilis RIK1285 (glycerol stock) : -80℃
 
■ 使用注意
1. 可以選擇使用In-Fusion HD Cloning Kit (Code No. 639649/639650)，結(jié)合使用Stellar Comptent Cells (Code No. 636763/636766)。
2. SP DNA mixture是由PCR擴(kuò)增獲得的DNA片段，因此，PCR擴(kuò)增的副產(chǎn)物如引物二聚體等也可能被克隆，但幾率較低。
 
 
 

頁(yè)面更新：2024-02-29 16:17:06

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