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CRISPR/Cas9導(dǎo)入方法

對于哺乳動物細(xì)胞基因編輯，我們通常建議導(dǎo)入由Cas9蛋白質(zhì)和單向?qū)NA（sgRNA）組成的核糖核蛋白（RNP）復(fù)合物。與其他方法相比，RNP在細(xì)胞中停留的時間短，劑量小，可降低細(xì)胞毒性，減少非靶標(biāo)位點(diǎn)的基因編輯。

RNP可以通過重組Cas9蛋白質(zhì)以及體外轉(zhuǎn)錄的向?qū)NA以電穿孔的方式或使用由細(xì)胞衍生的納米囊泡來導(dǎo)入。我們還提供使用慢病毒、腺相關(guān)病毒和質(zhì)粒進(jìn)行導(dǎo)入的試劑盒。


■ 通過電穿孔方法導(dǎo)入RNPs
	重組Cas9蛋白質(zhì)-電穿孔級別我們的Cas9蛋白質(zhì)可以實(shí)現(xiàn)高效的基因編輯，包括iPS和造血干細(xì)胞。

	sgRNA體外轉(zhuǎn)錄該試劑盒為Cas9介導(dǎo)的基因編輯提供了制備和評估sgRNAs效率的簡便方法。


■ 使用細(xì)胞納米囊泡（gesicles）導(dǎo)入RNPs
	Gesicle制備系統(tǒng) 了解Guide-it CRISPR/Cas9 Gesicle Production System產(chǎn)品組成和工作流程。

	Gesicles可用于廣泛細(xì)胞類型可以制備含有定制sgRNA/Cas9核糖核蛋白復(fù)合物的細(xì)胞納米囊泡，并用于廣泛細(xì)胞類型基因編輯。

	Gesicles可降低脫靶效應(yīng) 本技術(shù)說明討論了使用CRISPR/Cas9細(xì)胞納米囊泡進(jìn)行基因編輯可避免不必要的脫靶效應(yīng)。


■ 使用病毒或者質(zhì)粒進(jìn)行CRISPR介導(dǎo)的基因編輯
	使用AAV進(jìn)行CRISPR/Cas9基因編輯對于轉(zhuǎn)染哺乳動物細(xì)胞類型來說，很難通過質(zhì)粒轉(zhuǎn)染來導(dǎo)入Cas9和sgRNA，借助病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)可以有效克服這一困難。

	質(zhì)粒系統(tǒng) 克隆和表達(dá)單向?qū)NA的質(zhì)粒系統(tǒng)，使用CRISPR/Cas9技術(shù)進(jìn)行哺乳動物細(xì)胞基因編輯。

	慢病毒系統(tǒng) 慢病毒介導(dǎo)的CRISPR/Cas9基因編輯系統(tǒng)，其中Lenti-X Tet-On 3G系統(tǒng)能夠?qū)崿F(xiàn)四環(huán)素誘導(dǎo)的Cas9表達(dá)。

頁面更新：2020-03-18 16:09:23

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