本酶是噬菌體T7 DNA編碼的酶,以含有T7啟動子序列的雙鏈DNA為模板,以NTP為底物,合成與啟動子下游的單鏈DNA互補的RNA。本酶對T7啟動子序列具有高度特異性,不能識別其它生物來源的啟動子。 |
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■ 保存 |
-20℃。 |
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■ 起源 |
Escherichia coli carrying the plasmid containing the gene for phage T7 RNA polymerase gene. |
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■ 性質 |
1. 分子量:約98,000。
2. 亞單位:單一的多肽。
3. 最適pH:pH8.0。
4.
輔因子:Mg2+(最適濃度:8 mM),還原劑 (5 mM DTT)。
5. 激活劑:2 mM亞精胺 (4 mM亞精胺與DNA形成共沉淀)。
6. 抑制劑:NEM(10-4 M)、PCMB(5×10-8 M)。 |
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■ 活性定義 |
在37℃、pH8.0的條件下,1小時內(nèi)使1 nmol的 [3H] GMP摻入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定義為1個活性單位(unit)。 |
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■ 用途 |
1. 合成單鏈RNA。
2. 合成高標記RNA探針。
3. 合成siRNA前體。
4. 制作RNA剪接反應 (RNA Splicing) 的前體。
5. 以帽類似物 (Cap analog) 為引物,制作Capped mRNA。 |
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■ 使用注意 |
1. 為了特定區(qū)域的有效轉錄,建議在其區(qū)域下游把模板DNA預先切成平端或5′突出末端。
2. 緩沖液中的亞精胺與核酸結合可能形成不溶物。建議最后加入模板DNA。 |