重組蛋白疫苗研究解決方案 |
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| SARS-CoV-2的研究正在以驚人的速度進(jìn)行?？茖W(xué)家們正在嘗試識(shí)別可能引發(fā)對(duì)該病毒的免疫反應(yīng)的抗原決定簇，這是開發(fā)新疫苗的重要一步。Takara Bio提供了一系列創(chuàng)新技術(shù)來支持這項(xiàng)工作。疫苗的研發(fā)包括利用測(cè)序和生物信息學(xué)分析病毒及宿主基因組以確定潛在的靶標(biāo)，克隆和分離候選抗原決定簇，測(cè)試動(dòng)物模型的免疫反應(yīng)，最后對(duì)主要候選對(duì)象進(jìn)行臨床試驗(yàn)。 | |||||||||||||||||||||||||||||
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病毒與宿主的基因組學(xué) | ||||||||||||||||||||||||||||
| SARS-CoV-2病毒的全基因組測(cè)序，可以提供有價(jià)值的有關(guān)可能引發(fā)免疫反應(yīng)的潛在抗原決定簇信息。Takara Bio的SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v2 - Pico Input Mammalian在中國(guó)已用于SARS-CoV-2測(cè)序，以獲得病毒的全基因組序列。通過對(duì)COVID-19感染者或康復(fù)者進(jìn)行免疫分組庫(kù)分析，可為進(jìn)一步促進(jìn)抗原和疫苗靶標(biāo)識(shí)別提供更多信息。高靈敏度的SMARTer Human BCR IgG IgM H/K/L Profiling Kit和SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit v2可用于監(jiān)測(cè)從感染到康復(fù)過程中BCR（B細(xì)胞受體）和TCR（T細(xì)胞受體）的克隆型變化。 | |||||||||||||||||||||||||||||
| SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v2 - Pico Input Mammalian | |||||||||||||||||||||||||||||
| · 250 pg-10 ng 的total RNA起始量，樣本稀少也能高效建庫(kù)！ · 專為低質(zhì)量樣本設(shè)計(jì)，無需進(jìn)行rRNA前處理操作！ · 隨機(jī)引物起始，6小時(shí)內(nèi)即可制備高質(zhì)量文庫(kù)！ |
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| SMARTer Human BCR IgG IgM H/K/L Profiling Kit | |||||||||||||||||||||||||||||
| · 可從外周血單核細(xì)胞（PBMC）純化的10 ng-1μg的總RNA或從B細(xì)胞純化的1-100 ng的總RNA起始，正確擴(kuò)增并通過測(cè)序鑒別人IgG亞類 · 添加UMI，可校正來自PCR錯(cuò)誤、重復(fù)序列以及序列錯(cuò)誤的讀取 |
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| SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit v2 | |||||||||||||||||||||||||||||
| · 支持total RNA(10 ng-1 μg外周血淋巴細(xì)胞來源或 1 ng-100 ng T細(xì)胞來源 total RNA)，或者純化后完整的T細(xì)胞（1,000-10,000個(gè)）起始 · 每次反應(yīng)僅需一對(duì)引物擴(kuò)增相應(yīng)的TCR亞基 · 引入U(xiǎn)MI建庫(kù)，校正PCR偏差及測(cè)序錯(cuò)誤產(chǎn)生的reads |
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| 已有研究人員在針對(duì)SARS-CoV-2研究過程中使用了SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v2 - Pico Input Mammalian ，這些工作現(xiàn)已發(fā)表： | |||||||||||||||||||||||||||||
| · Wu, F. et al., A new coronavirus associated with human respiratory disease in China . Nature. Mar;579(7798):265 269. (2020) · Lu, Jing et al. Genomic Epidemiology of SARS CoV 2 in Guangdong Province, China. Cell vol. 181,5 · Pfefferle, Susanne et al. Complete Genome Sequence of a SARS CoV 2 Strain Isolated in Northern Germany. Microbiology resource announcements vol. 9,23 (2020) |
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生物信息學(xué)分析 | ||||||||||||||||||||||||||||
| 接下來的一步是對(duì)病毒基因組和宿主的BCR和TCR免疫組庫(kù)進(jìn)行生物信息學(xué)分析，以揭示SARS-CoV-2的抗原，并選擇疫苗靶標(biāo)（病毒表面受體）。Takara Bio的Immune Profiler Software可與SMARTer Human BCR IgG IgM H/K/L Profiling Kit配合使用，以分析有關(guān)克隆型數(shù)量和可變區(qū)V（D）J序列的信息。 | |||||||||||||||||||||||||||||
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疫苗靶標(biāo)的克隆 | ||||||||||||||||||||||||||||
| 研究人員可以利用Cloning Enhancer，質(zhì)粒純化試劑盒，Stellar感受態(tài)細(xì)胞以及In-Fusion無縫克隆技術(shù)來進(jìn)行高通量克隆，從而加快病毒受體和疫苗載體的構(gòu)建： | |||||||||||||||||||||||||||||
| · 高效——對(duì)于0.5～15 kb的插入片段，克隆效率可超過95% · 不依賴序列——可在任意載體的任意位置進(jìn)行任意片段的克隆 · 無縫連接——克隆連接處無多余的堿基對(duì)（或疤痕序列） · 一盒多用——只需一個(gè)試劑盒就可進(jìn)行多片段克隆和定點(diǎn)誘變 |
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| 已有研究人員在研發(fā)針對(duì)冠狀病毒（包括SARS-CoV-2）疫苗的過程中使用了In-Fusion克隆技術(shù)，這些工作現(xiàn)已發(fā)表： | |||||||||||||||||||||||||||||
| · Kato, H. et al. Development of a recombinant replication-deficient rabies virus-based bivalent-vaccine against MERS-CoV and rabies virus and its humoral immunogenicity in mice. PLoS One. 14, DOI:10.1371/journal.pone.0223684 (2019). · Letko, L., Marzi, A., & Munster, V. Functional assessment of cell entry and receptor usage for SARSCoV-2 and other lineage B betacoronaviruses. Nat. Microbiol. 6, 562-569 (2020). · Terada, Y., Kawachi, K., Matsuura, Y., Wataru, W., Kamitani, W. MERS coronavirus nsp1 participates in an efficient propagation through a specific interaction with viral RNA. Virol. 511, 95-105 (2019). |
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表達(dá)和純化疫苗靶標(biāo) | ||||||||||||||||||||||||||||
| 您可以使用BacPAK桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)來表達(dá)您感興趣的蛋白質(zhì)，以用于疫苗開發(fā)。該技術(shù)易于擴(kuò)大規(guī)模，蛋白質(zhì)表達(dá)水平高，對(duì)人體無致病性。此外，該系統(tǒng)產(chǎn)生的靶蛋白在結(jié)構(gòu)、生物活性以及免疫反應(yīng)性方面與天然蛋白質(zhì)都是相似的。為了優(yōu)化重組蛋白質(zhì)的表達(dá)水平，可以使用BacPAK Baculovirus Rapid Titer Kit快速確定病毒的滴度，該試劑盒使用標(biāo)準(zhǔn)免疫測(cè)定法在48小時(shí)內(nèi)即可準(zhǔn)確測(cè)定桿狀病毒滴度，而斑塊和終點(diǎn)稀釋測(cè)定法通常需要5-10天。一旦靶蛋白從這些純化的產(chǎn)物中表達(dá)出來，就可以使用我們的Capturem新型高容量膜純化技術(shù)來快速純化His標(biāo)簽標(biāo)記的疫苗候選蛋白： | |||||||||||||||||||||||||||||
| · 快速、方便的工作流程——Capturem膜上偶聯(lián)鎳離子作為配基，使用方便的純化柱/純化板/過濾裝置，室溫下操作僅需5-30分鐘 · 高純度——柱床體積小，帶入污染少 · 兼容多種添加劑——包括EDTA、DTT、BME、甘油、TCEP等（兼容試劑一覽表） · 通用性——易于從哺乳動(dòng)物/細(xì)菌的細(xì)胞裂解液和上清液中純化 |
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| 已有研究人員在疫苗開發(fā)工作中使用我們的Capturem His技術(shù)發(fā)表了研究成果： | |||||||||||||||||||||||||||||
| · Do, V. T. et al. Recombinant adenovirus carrying a core neutralizing epitope of porcine epidemic diarrhea virus and heat-labile enterotoxin B of Escherichia coli as a mucosal vaccine. Arch. Virol. 165, 609-618 (2020). · Martínez-Hernández, S. L. et al. An anti-amoebic vaccine: generation of the recombinant antigen LC3 from Entamoeba histolytica linked to mutated exotoxin A(PEΔIII) via the Pichia pastoris system. Biotechnol. Lett. 39, 1149-1157 (2017). |
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使用疫苗靶標(biāo)對(duì)小鼠進(jìn)行免疫反應(yīng)，篩選血清的抗病毒活性，并優(yōu)化有前景的候選對(duì)象 | ||||||||||||||||||||||||||||
| Takara Bio的SMARTer Mouse BCR IgG H/K/L Profiling Kit和SMARTer Mouse TCR a/b Profiling Kit可用于通過監(jiān)測(cè)BCR和TCR克隆型的多樣性變化，加快針對(duì)目標(biāo)疫苗的抗病毒活性的免疫血清篩選過程。通過分析和比較接種動(dòng)物在感染病毒之前和之后的抗體和T細(xì)胞反應(yīng)，進(jìn)一步優(yōu)化了有前景的候選疫苗。 | |||||||||||||||||||||||||||||
| SMARTer Mouse BCR IgG H/K/L Profiling Kit | |||||||||||||||||||||||||||||
| · 支持10 ng-3 μg來自于脾臟、淋巴結(jié)、PBMCs 及雜交瘤的總RNA起始 · 在大多數(shù)情況下，可以有效擴(kuò)增并通過測(cè)序鑒別小鼠IgG亞類 · 可以高靈敏度地從同一樣品中檢測(cè)不同鏈 |
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| SMARTer Mouse TCR a/b Profiling Kit | |||||||||||||||||||||||||||||
| · 支持10 ng 至500 ng的來源于小鼠脾臟、胸腺或PBMCs的總RNA起始，也可以1,000 至 10,000個(gè)純化的T細(xì)胞起始 · 可獲得TCR mRNA轉(zhuǎn)錄本可變區(qū)的全長(zhǎng)序列 · 可同時(shí)或單獨(dú)分析TCR兩個(gè)亞基的多樣性 · 無需多重PCR，每次反應(yīng)利用一對(duì)引物擴(kuò)增相應(yīng)的TCR亞基 |
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評(píng)估選定的最終候選疫苗在臨床試驗(yàn)中的有效性 | ||||||||||||||||||||||||||||
| 監(jiān)測(cè)免疫反應(yīng)是評(píng)估最終候選疫苗有效性的關(guān)鍵。通過NGS對(duì)BCR和TCR進(jìn)行序列分析，可以正確監(jiān)測(cè)克隆型的變化，并識(shí)別疫苗特異性的克隆型。 | |||||||||||||||||||||||||||||
| 【產(chǎn)品一覽表】 | |||||||||||||||||||||||||||||
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| 新一代測(cè)序相關(guān) | |||||||||||||||||||||||||||||
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| 表達(dá)和純化相關(guān) | |||||||||||||||||||||||||||||
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| 克隆相關(guān) | |||||||||||||||||||||||||||||
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頁(yè)面更新：2020-11-24 10:03:18
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