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無(wú)縫克隆試劑盒In-Fusion Snap Assembly Master Mix
品牌	Code No.	產(chǎn)品名稱	包裝量	價(jià)格（元）	說明書	數(shù)量
Clontech	638947	In-Fusion^® Snap Assembly Master Mix	10 Rxns	￥744
Clontech	638948	In-Fusion^® Snap Assembly Master Mix	50 Rxns	￥3,240
Clontech	638949	In-Fusion^® Snap Assembly Master Mix	250 Rxns	￥12,931

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效率更高、重復(fù)性更好的無(wú)縫克隆試劑登場(chǎng)了！
In-Fusion Snap Assembly Master Mix是在In-Fusion HD Cloning Kit基礎(chǔ)上升級(jí)的新產(chǎn)品，與其他公司同類產(chǎn)品相比克隆效率更高。
In-Fusion HD Cloning Kit與其他公司同類產(chǎn)品對(duì)比數(shù)據(jù)參見：In-Fusion與其他公司的無(wú)縫克隆產(chǎn)品對(duì)比有何不同？

■ 制品說明

In-Fusion Snap Assembly是Takara推出的新一代無(wú)縫克隆試劑，延續(xù)了上一代HD系列產(chǎn)品的優(yōu)點(diǎn)，僅通過15分鐘反應(yīng)，即可將1個(gè)或多個(gè)PCR片段按照設(shè)計(jì)要求插入到任意載體的任意位置，對(duì)于待克隆的PCR片段，不需要進(jìn)行限制酶酶切、磷酸化及末端平滑化等處理。Snap Assembly系列的實(shí)驗(yàn)效率和一致性均超過HD系列產(chǎn)品，更擅長(zhǎng)多片段克隆以及高通量實(shí)驗(yàn)。

■ 制品內(nèi)容

· 5X In-Fusion Snap Assembly Master Mix
· linearized pUC19 Control Vector
· 2 kb Control Insert

※ PCR產(chǎn)物純化需要另外準(zhǔn)備純化試劑，例如可使用TaKaRa MiniBEST Agarose Gel DNA Extraction Kit Ver.4.0（Code No. 9762）純化柱。
※ 試劑盒中不附帶感受態(tài)細(xì)胞，轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用高效率的感受態(tài)細(xì)胞，例如 E. coli HST08 Premium Competent Cells（Code No. 9128）或 Stellar感受態(tài)細(xì)胞。
※ 擴(kuò)增目的片段及對(duì)載體進(jìn)行反向PCR時(shí)建議使用高保真酶 PrimeSTAR Max DNA Polymerase（Code No.：R045A/B）。

■ 制品特點(diǎn)

· 可在任意載體的任意位置進(jìn)行定向克隆
· 操作簡(jiǎn)單方便，無(wú)需進(jìn)行反復(fù)的酶切連接
· 對(duì)于50 bp～15 kb的插入片段，克隆效率可超過95%
· 與現(xiàn)有的In-Fusion HD Cloning Kit相比，多片段克隆效率大幅提升
· 在高正確率的基礎(chǔ)上，轉(zhuǎn)化后得到的菌落數(shù)比其他公司的同類產(chǎn)品更多

■ In-Fusion原理

In-Fusion技術(shù)利用In-Fusion酶，通過識(shí)別DNA片段（例如PCR片段和線性化載體）末端15 bp的同源序列來(lái)實(shí)現(xiàn)高效、準(zhǔn)確地融合。這15 bp的同源序列可在設(shè)計(jì)目的片段擴(kuò)增引物時(shí)，使用我們的在線引物設(shè)計(jì)工具進(jìn)行設(shè)計(jì)。In-Fusion酶從線性DNA鏈的3'末端切割核苷酸，這樣，兩個(gè)DNA片段之間便形成互補(bǔ)堿基對(duì)，可通過退火使片段連接起來(lái)。通過這一原理可將單個(gè)或多個(gè)片段克隆到載體中，而無(wú)需亞克隆。除此之外，In-Fusion技術(shù)還可以應(yīng)用于突變導(dǎo)入、基因合成、特定基因結(jié)構(gòu)域改變等。

圖1. In-Fusion克隆標(biāo)準(zhǔn)工作流程示意圖（適用所有In-Fusion克隆試劑盒）。

■ In-Fusion引物設(shè)計(jì)

In-Fusion克隆用引物的設(shè)計(jì)與目的片段PCR擴(kuò)增用引物的設(shè)計(jì)基本相同。不同之處是需要在特異性引物的5'末端添加15個(gè)與載體末端序列相同的堿基（參考下圖）。Takara為您提供了方便的在線引物設(shè)計(jì)工具，歡迎使用。

■ 對(duì)比實(shí)驗(yàn)例

實(shí)驗(yàn)例1

圖2. In-Fusion Snap Assembly和In-Fusion HD性能比較。分別使用In-Fusion Snap Assembly和In-Fusion HD將五個(gè)不同的插入片段（大小從405 bp到1,005 bp不等）同時(shí)克隆到一個(gè)經(jīng)反向PCR線性化的2.7 kb的載體中，每組克隆反應(yīng)重復(fù)三次。兩個(gè)反應(yīng)系統(tǒng)除了酶預(yù)混液不同之外，擴(kuò)增引物和其他試劑全部相同。轉(zhuǎn)化涂菌后顯示Snap Assembly組長(zhǎng)出的菌落數(shù)是HD組的4倍，挑取10個(gè)轉(zhuǎn)化菌落，進(jìn)一步使用Sanger測(cè)序法進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果顯示二者正確率均超過90%。

實(shí)驗(yàn)例2

數(shù)據(jù)來(lái)源于Takara Bio USA, Inc.

圖3. In-Fusion Snap Assembly與其他公司同類產(chǎn)品A的比較（使用反向PCR的方法線性化載體）。 將3.8 kb的片段（圖A）或34.2 kb的腺病毒片段（圖B）克隆到通過反向PCR線性化的2.7 kb的載體中，每組克隆反應(yīng)重復(fù)三次。引物按照所使用試劑廠家的要求進(jìn)行設(shè)計(jì)。轉(zhuǎn)化涂菌后顯示In-Fusion Snap Assembly組長(zhǎng)出的菌落數(shù)是A產(chǎn)品組的2倍，各挑取20個(gè)轉(zhuǎn)化菌落，再使用Sanger測(cè)序法和菌落PCR的方法分別進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果顯示In-Fusion Snap Assembly的正確率超過95%。

實(shí)驗(yàn)例3

數(shù)據(jù)來(lái)源于Takara Bio USA, Inc.

圖4．In-Fusion Snap Assembly與其他公司同類產(chǎn)品A的比較（使用限制酶酶切的方法線性化載體）。將3.8 kb的片段克隆到通過限制酶酶切線性化的標(biāo)準(zhǔn)載體中，載體因使用不同的限制酶而產(chǎn)生三種不同末端，5'突出端（圖A），平端（圖B）和3'突出端（圖C），每組克隆反應(yīng)重復(fù)三次，引物按照所使用試劑廠家的要求進(jìn)行設(shè)計(jì)。轉(zhuǎn)化涂菌后顯示In-Fusion Snap Assembly組長(zhǎng)出的菌落數(shù)是A產(chǎn)品組的5-16倍，根據(jù)載體末端類型的不同而不同。各挑取20個(gè)轉(zhuǎn)化菌落，進(jìn)一步使用Sanger測(cè)序法進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果顯示In-Fusion Snap Assembly的正確率超過95%。

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