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產(chǎn)品選擇指南

技術服務信息

當前位置：首頁> 產(chǎn)品選擇指南 > 一般PCR相關制品 > RT-PCR試劑盒 > 高保真RT-PCR試劑盒PrimeScript™ II High Fidelity RT-PCR Kit
高保真RT-PCR試劑盒PrimeScript™ II High Fidelity RT-PCR Kit
品牌 Code No. 產(chǎn)品名稱 包裝量 價格（元） 說明書 數(shù)量
Takara R023A PrimeScript™ II High Fidelity RT-PCR Kit 50 Rxns ￥1,516
Takara R023B (A × 4) PrimeScript™ II High Fidelity RT-PCR Kit 50 Rxns × 4 ￥5,456
無標題文檔
 
 
RNA提取試劑 RT-pcr試劑 DNA Markers PCR儀器
 
 
■ 制品內(nèi)容 (50 次量*1)
PrimeScript II RT Enzyme Mix 50 μl
5×PrimeScript II Buffer 200 μl
dNTP Mixture (10 mM each) 100 μl
Oligo dT Primer (50 μM) 50 μl
Random 6 mers (20 μM) 50 μl
PrimeSTAR GXL for RT-PCR 100 μl
5×PrimeSTAR GXL Buffer 500 μl
Control F-1 Primer*2 (20 μM) 10 μl
Control R-1 Primer*3 (20 μM) 10 μl
Positive Control RNA (2×105 copies/μl) 20 μl
RNase Free dH2O 1ml
   
*1 反轉(zhuǎn)錄反應20 μl、PCR反應50 μl，2 Step RT-PCR時可使用50次。
*2 Positive Control RNA用上游引物。
*3 Positive Control RNA用下游引物。
 
 
■ 制品說明
PCR (Polymerase Chain Reaction；聚合酶鏈式反應) 是一種使用兩種引物擴增目的DNA的方法。雖然原理上PCR法是擴增DNA，RNA不能直接被擴增，但是經(jīng)過反轉(zhuǎn)錄酶的作用將RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA后擴增 (RT-PCR)，PCR法便可應用于RNA的解析了。目前，此方法已廣泛應用于RNA的構造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表達解析等多種領域。
PrimeScript II High Fidelity RT-PCR Kit是一種對長鏈RNA及富含GC序列的RNA合成cDNA時具有高保真性的RT-PCR用試劑盒。
本試劑盒中使用的PrimeScript II反轉(zhuǎn)錄酶是改良型的PrimeScript RTase，可在合成長鏈cDNA時發(fā)揮效力，同時PCR時使用了對長鏈及富含GC序列的cDNA擴增時具有高保真性的DNA聚合酶PrimeSTAR GXL DNA Polymerase。因PrimeScript II RTase可很好地抑制由于引物錯配引起的非特異性擴增，即使使用高濃度的Oligo dT Primer進行反轉(zhuǎn)錄反應也不會導致cDNA合成時的阻害作用，因此使用高濃度的RNA作為模板也可進行良好的反轉(zhuǎn)錄反應。
本試劑盒中使用PrimeScript II RTase與RNase Inhibitor的混合型PrimeScript II RT Enzyme Mix。另外，PrimeSTAR GXL DNA Polymerase克服了以往的高保真酶由于核酸濃度過高而存在的反應阻害性，在高濃度核酸存在條件下也能發(fā)揮其效力，可以在更寬廣的RNA模板范圍內(nèi)獲得cDNA擴增產(chǎn)物。 本試劑盒具有以下優(yōu)點:
1. 能夠從長鏈RNA及富含GC序列的RNA中獲得錯配率很低的cDNA擴增產(chǎn)物。
2. 在42℃條件下反轉(zhuǎn)錄反應也可以使具有復雜結構的RNA進行良好的延伸。
3. 反應體系中Total RNA的使用范圍非常寬廣，便于使用。
本試劑盒含有反轉(zhuǎn)錄反應及PCR擴增反應所需要的全部試劑。并且，也可以進行1 Step RT-PCR反應。
 
■ 各種引物的序列
引物名稱 各引物序列
Random 6 mers Pd (N)6
Oligo dT Primer Takara獨自開發(fā)的dT區(qū)域的序列
Control F-1 Primer 5′-CTGCTCGCTTCGCTACTTGGA-3′
Control R-1 Primer 5′-CGGCACCTGTCCTACGAGTTG-3′
 
 
■ Positive Control RNA
本試劑盒中的Control RNA是以pSPTet3質(zhì)粒 (質(zhì)粒中的SP6啟動子下游插入長約1.4 kb的pBR322來源的DNA片段，DNA片段上含有抗四環(huán)素基因) 為模板由SP6 RNA聚合酶經(jīng)體外轉(zhuǎn)錄而得到的。
 
圖1. Control RNA：使用Control Primer時所能擴增的DNA片段
 
■ 保存
-20℃。
 
■ 使用注意
1. 當同時需要進行數(shù)次RT-PCR反應時，應先配制各種試劑的混合液 (Master Mix；其中包括RNase Free dH2O、Buffer、dNTP Mixture等)，然后再分裝到每個反應管中。這樣，可使所取的試劑體積更準確，減少試劑損失，避免重復分取同一試劑。同時也可以減少實驗操作或?qū)嶒炛g產(chǎn)生的誤差。
2. 使用PrimeScript II RT Enzyme Mix、PrimeSTAR GXL for RT-PCR等酶類產(chǎn)品時，應輕輕混勻，避免起泡；分取之前要小心地離心收集到反應管底部；由于酶保存液中含有50%的甘油，粘度高，分取時應慢慢吸取。
3. 酶制品應在實驗前才從-20℃中取出，使用后也應立即放入-20℃保存。
4. 為了防止Positive Control RNA分解，應盡量避免反復凍融。有條件的實驗室最好保存于-70℃～-80℃。
5. 分裝試劑時務必使用新的槍頭 (Tip)，以防止樣品間污染。
 
 

頁面更新：2023-11-01 16:22:38

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