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產(chǎn)品選擇指南

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感受態(tài)細(xì)胞E.coli HST16CR Competent Cells
品牌 Code No. 產(chǎn)品名稱 包裝量 價(jià)格（元） 說(shuō)明書(shū) 數(shù)量
Takara 9131 E.coli HST16CR Competent Cells 100 μl×10 ￥744
 
■ 制品內(nèi)容
E.coli HST16CR Competent Cells 100 μl × 10
pUC19 plasmid (0.1 ng/μl) 10 μl
SOC media* 1 ml × 10
*SOC Media:     2%   Tryptone
 0.5%   Yeast extract
 10 mM   NaCl
 2.5 mM   KCl
  10 mM   MgSO4
10 mM   MgCl2
 20 mM   Glucose
 
■ 制品說(shuō)明
感受態(tài)細(xì)胞是具有攝取外源DNA能力的受體菌，可攝取基因重組質(zhì)粒等，是轉(zhuǎn)化時(shí)的重要工具。Takara在Hanahan’s method基礎(chǔ)上進(jìn)行了改良，制備出的E. coli HST16CR Competent Cells。
E. coli HST16CR Competent Cells是以E. coli HST08 Premium Competent Cells（Code No. 9128）為基礎(chǔ)，獲得的ColE1 ori的復(fù)制相關(guān)基因 pcnB缺失的具有高轉(zhuǎn)化效率的菌株。由于pcnB基因的缺失，能夠降低pUC系列載體的拷貝數(shù)，可有效用于難以克隆的含跨膜結(jié)構(gòu)域蛋白質(zhì)等、克隆基因?qū)Υ竽c桿菌生長(zhǎng)有抑制作用的高拷貝載體克隆。
因?yàn)槭且?em>E. coli HST08 Premium Competent Cells為基礎(chǔ)，缺失外源甲基化DNA的基因群(mrr -mcrBC-hsdRMS )和mcrA，因此可用于甲基化DNA的克隆、基因組文庫(kù)構(gòu)建和常規(guī)亞克隆。另外，使用pUC系列載體轉(zhuǎn)化時(shí)，可通過(guò)β-半乳糖苷酶的α-互補(bǔ)性，在培養(yǎng)基中添加X(jué)-gal進(jìn)行藍(lán)白篩選，以篩選重組體。
X-Gal：5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside
 
■ 細(xì)胞濃度
1-2×109 bacteria/ml
 
■ Genotype
E. coli HST16 CR: ： F-, endA1 , supE44 , thi -1, recA 1, relA 1, gyrA 96, phoA ,Φ80d lacZ ΔM15,Δ（ lacZYA - argF ）U169 , Δ ( mrr - hsdRMS - mcrBC ), ΔmcrA ,ΔpcnB, λ-
 
■ 保存
-80℃。
注意： 如果不在-80℃下保存，轉(zhuǎn)化效率將會(huì)降低。此時(shí)，在使用前，請(qǐng)使用附帶的pUC19 對(duì)照質(zhì)粒來(lái)確認(rèn)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。不能液氮保存。
 
■ 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
[1] 轉(zhuǎn)化效率
轉(zhuǎn)化質(zhì)粒載體時(shí)，轉(zhuǎn)入1 ng 的pUC19 plasmid，涂于Amp+ 的L-plate進(jìn)行篩選。
轉(zhuǎn)化效率 : >1 x 108 colonies/μg pUC19 plasmid
[2] β-半乳糖苷酶的α-互補(bǔ)性
轉(zhuǎn)化pUC19 plasmid時(shí)，確認(rèn)含100 μg/ml ampicilin 和 60 μg/ml X-Gal的L-agar plate上出現(xiàn)藍(lán)色菌落。
 
■ 注意事項(xiàng)
1. 取出所需管數(shù)的感受態(tài)細(xì)胞后，搬運(yùn)時(shí)請(qǐng)置于干冰/乙醇中。
2. 可使用1.5 ml microcentrifuge tubes代替14 ml 圓底 tubes (BD Code: 352059 或 352057，等)，但效率可能會(huì)降低。
3. 當(dāng)使用100 μl感受態(tài)細(xì)胞時(shí)，加入不超過(guò)10 ng的高純度質(zhì)粒DNA。增加DNA量轉(zhuǎn)化效率會(huì)降低。
4. 當(dāng)改變感受態(tài)細(xì)胞使用體積或tube類型時(shí)，需要研討適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)條件。例如，當(dāng)使用1.5 ml microcentrifuge tubes時(shí)，請(qǐng)42℃加熱60秒。
5. 可以使用L-broth 或φb-broth替代SOC培養(yǎng)基。此時(shí)，轉(zhuǎn)化效率可能會(huì)降低。
  ·L-broth：10 g Tryptone, 5 g Yeast extract, 5 g NaCl，用1 M NaOH調(diào)整pH到7.5，加水使終體積為1 L，高壓滅菌。
  ·φ b-broth：5 g Yeast extract, 20 g Tryptone, 5 g MgSO4·7H2O，用1 M KOH調(diào)整pH到7.5，加水使終體積為1 L，高壓滅菌。
  ·L-plate: 10 g Tryptone, 5 g Yeast extract, 5 g NaCl，用1 M NaOH調(diào)整pH到7.5，添加agar到1.5%，加水使終體積為1 L，高壓滅菌。
6. 當(dāng)加入X-Gal時(shí)，按照以下操作進(jìn)行：
將 20 mg/ml X-Gal (溶解于二甲基甲酰胺) 按200-300 μl/100 ml 的比例加入到agar media中。
7. 不建議將解凍的感受態(tài)細(xì)胞再次冷凍保存。但是，如果再次凍結(jié)不可避免，將細(xì)胞置于干冰/乙醇中迅速冷凍，置于-80℃保存。但是，轉(zhuǎn)化效率可能會(huì)降低至少一個(gè)數(shù)量級(jí)。
 
 

頁(yè)面更新：2024-01-31 15:28:56

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