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| ■ 制品內(nèi)容 (Code No.: R022A : 50 次量*1) |
| PrimeScript RTase (for 2 step) |
25 μl |
| 5×PrimeScript Buffer |
200 μl |
| RNase Inhibitor (40 U/μl) |
25 μl |
| dNTP Mixture (10 mM each) |
50 μl |
| Oligo dT Primer (2.5 μM) |
50 μl |
| Random 6 mers (20 μM) |
50 μl |
| PrimeSTAR Max Premix (2×) |
625 μl × 2 |
| Control F-1 Primer*2 (20 μM) |
10 μl |
| Control R-1 Primer*3 (20 μM) |
10 μl |
| Positive Control RNA (2×105 copies/μl) |
20 μl |
| RNase Free dH2O |
1 ml |
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*1 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)20 μl、PCR反應(yīng)50 μl，2 Step RT-PCR時可使用50次。
*2 Positive Control RNA用上游引物。
*3 Positive Control RNA用下游引物。
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| Limited Use Label License: [M54] |
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| ■ 制品說明 |
PCR (Polymerase Chain Reaction；聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)) 是一種體外擴(kuò)增目的DNA的方法。雖然原理上PCR法是擴(kuò)增DNA，RNA不能直接被擴(kuò)增，但是經(jīng)過反轉(zhuǎn)錄酶的作用將RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA后進(jìn)行擴(kuò)增 (RT-PCR)，PCR法便可應(yīng)用于RNA的解析了。目前，此方法已廣泛應(yīng)用于RNA的構(gòu)造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表達(dá)解析等多種領(lǐng)域。
PrimeScript High Fidelity RT-PCR Kit是一種對Total RNA及mRNA合成cDNA時具有高保真性的RT-PCR用試劑盒。
本試劑盒中使用的反轉(zhuǎn)錄酶是Takara改良的M-MLV新型反轉(zhuǎn)錄酶PrimeScript RTase，PCR時使用了對cDNA擴(kuò)增時具有很高保真性的DNA聚合酶PrimeSTAR MAX DNA Polymerase。因PrimeSTAR MAX是兼具高保真性與高擴(kuò)增效率的預(yù)混型酶，模板濃度適用范圍廣，可用于高保真性的cDNA克隆等重要反應(yīng)中。
2 Step RT-PCR作為本試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)操作流程，2 Step RT-PCR操作流程具有以下優(yōu)點(diǎn):
1. 能夠高效率地獲得高保真性的RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。
2. 在42℃條件下反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)也可以使具有復(fù)雜結(jié)構(gòu)的RNA進(jìn)行良好的延伸。
3. 反應(yīng)體系中Total RNA的使用范圍非常寬廣，便于使用。
本試劑盒含有反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)及PCR擴(kuò)增反應(yīng)所需要的全部試劑。并且，也可以進(jìn)行1 Step RT-PCR反應(yīng)。
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| ■ 保存 |
-20℃。
注意：PrimeSTAR MAX Premix (2×) 反復(fù)凍融25次后，已確認(rèn)其活性沒有發(fā)生改變，但要注意盡量避免凍融次數(shù)過多。 |
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| ■ 試劑盒特點(diǎn) |
| 使用2 Step RT-PCR標(biāo)準(zhǔn)操作流程時 |
| RNA模板 |
適用于所有RNA |
| 擴(kuò)增片段大小 |
6 kb產(chǎn)物 |
| 反轉(zhuǎn)錄酶 |
PrimeScript RTase (反應(yīng)溫度在42℃) |
| DNA Polymerase |
PrimeSTAR Max DNA Polymerase (2×premix) |
| RNase Inhibitor |
必須使用 (Kit中含有) |
| 1st strand cDNA合成用引物 |
Random 6 mers、Oligo dT Primer、特異性下游引物可供選擇 |
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| 使用1 Step RT-PCR操作流程時 |
| RNA模板 |
適用于所有RNA |
| 擴(kuò)增片段大小 |
6 kb產(chǎn)物 |
| 反轉(zhuǎn)錄酶 |
PrimeScript RTase (反應(yīng)溫度50℃) |
| DNA Polymerase |
PrimeSTAR Max DNA Polymerase (2×premix) |
| RNase Inhibitor |
必須使用 (Kit中含有) |
| 1st strand cDNA合成用引物 |
使用特異性下游引物 (PCR擴(kuò)增反應(yīng)用反義鏈引物)
(不可使用Random 6 mers及Oligo dT Primer) |
| 操 作 |
在同一個反應(yīng)管中可連續(xù)進(jìn)行RT-PCR反應(yīng) |
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PrimeScript™ II High Fidelity RT-PCR Kit
PrimeScript™ One Step RT-PCR Kit Ver.2
TaKaRa MiniBEST Universal RNA Extraction Kit
PrimeScript™ II 1st Strand cDNA Synthesis Kit
PrimeScript™ II Reverse Transcriptase
PrimeScript™ Double Strand cDNA Synthesis Kit
TaKaRa PCR Thermal Cycler Dice™ Touch
京公網(wǎng)安備 110114000405號
