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■ 制品內容 (Code No.: RR023A : 100次量*1)  |
| BcaBEST Polymerase (22 U/μl) |
50 μl |
| RNase Inhibitor (40 U/μl) |
25 μl |
| Random 9 mers (50 μM) |
50 μl |
| Oligo dT Primer (50 μM) |
50 μl |
| RNase Free dH2O |
1 ml |
| Bca-Optimized Taq (5 U/μl) |
25 μl |
| 2 × Bca lst Buffer |
1.25 ml × 2 支 |
| 5 × Bca 2nd Buffer |
800 μl |
| dNTP Mixture (各10 mM) |
50 μl |
| MgSO4 (25 mM) |
500 μl |
| Control F-1 Primer*2 (20 μM) |
25 μl |
| Control R-1 Primer*3 (20 μM) |
25 μl |
| Positive Control RNA (2 × 105 copies/μl) |
25 μl |
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*1 反轉錄反應10 μl，PCR反應體系50 μl，可使用100次。
*2 Positive Control RNA用上游引物。
*3 Positive Control RNA用下游引物。 |
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| ■ 制品說明 |
PCR（Polymerase Chain Reaction；聚合酶鏈式反應）是一種體外擴增DNA的簡單而有效的方法。雖然原理上PCR法是擴增DNA，RNA不能直接被擴增，但是經過反轉錄酶的作用把RNA反轉錄成cDNA后，PCR法便可應用于RNA的解析了。目前，此方法已廣泛應用于RNA的構造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表達解析等多種領域。
本試劑盒含有從RNA反轉錄到cDNA以及擴增此cDNA所必需的全部試劑，即用Bacillus caldotenax來源的BcaBEST Polymerase從RNA合成cDNA，然后在同一試管內加入應用LA PCR技術研制的Bca-Optimized Taq擴增此cDNA。此外，使用BcaBEST Polymerase進行反轉錄反應的最適溫度是65℃，所以對具有復雜二級結構的RNA特別適合。 |
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| ■ 各種引物的序列 |
| 引物名稱 |
各引物序列 |
| Random 9 mers |
5′-NNNNNNNNN-3′ |
| Oligo dT Primer |
包含Takara特別設計的dT區(qū)域。本序列與TaKaRa RNA PCR Kit（AMV）Ver.3.0（Code No. RR019A/B）及TaKaRa RNA LA PCR Kit（AMV）Ver.1.1（Code No. RR012A）中的Oligo dT-Adaptor Primer的序列不同，沒有M13 Primer M4區(qū)域。 |
| Control F-1 Primer |
5′-CTGCTCGCTTCGCTACTTGGA-3′ |
| Control R-1 Primer |
5′-CGGCACCTGTCCTACGAGTTG-3′ |
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| ■ 試劑盒的原理 |
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| BcaBEST RNA PCR的原理圖 |
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| ■ 試劑盒特點 |
RNA模板 |
適用于所有RNA (對富含GC的mRNA及具有復雜二級結構的mRNA特別有效) |
擴增片段大小 |
5 kb以下 |
反轉錄酶 |
BcaBEST Polymerase (最適溫度65℃) |
DNA聚合酶 |
Bca-Optimized Taq |
RNase Inhibitor |
必須使用 (試劑盒中含有) |
合成cDNA第一條鏈的引物 |
Random 9 mers、Oligo dT-Adaptor Primer或 特異性下游PCR Primer 可供選擇 |
操 作 |
在同一反應管中進行 (反轉錄酶在進行PCR反應前須進行高溫失活) |
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京公網(wǎng)安備 110114000405號
