本酶是鼠傷寒沙門氏菌LT2的噬菌體SP6 DNA編碼的酶,分子量為96,000。本酶以含有SP6啟動子序列的雙鏈DNA為模板,以NTP為底物,合成與啟動子下游的單鏈DNA互補(bǔ)的RNA對SP6啟動子序列具有高度特異性,不能識別其它生物來源的啟動子。 |
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■ 保存 |
-20℃。 |
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■ 起源 |
Escherichia coli carrying the plasmid containing the gene for phage SP6 RNA polymerase gene |
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■ 活性定義 |
在37℃、pH7.5的條件下,1小時(shí)內(nèi)使1 nmol的 [3H] GMP摻入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定義為1個(gè)活性單位(unit)。 |
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■ 用途 |
1. 為Northern雜交以及Southern雜交制作高標(biāo)記探針。
2. 制作RNA剪接反應(yīng) (RNA Splicing) 的前體。
3. 以帽類似物 (Cap analog) 為引物,制作Capped mRNA。
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■ 使用注意 |
1. 最適pH為7.5,需要Mg2+和還原劑的存在,添加BSA及亞精胺可提高酶的活性。
2. 最適反應(yīng)溫度為40℃ (此時(shí)酶活性為37℃時(shí)的130%),當(dāng)所用酶量不超過300 U/ml,模板量不超過0.1 mg/ml時(shí)與RNA的合成量呈正比例。
3. 為了特定領(lǐng)域的有效轉(zhuǎn)錄,建議在其領(lǐng)域下游把模板DNA預(yù)先切成平端或5′突出末端。
4. 緩沖液中所含亞精胺容易與核酸形成復(fù)合物產(chǎn)生不溶物,建議最后加入DNA模板。 |