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基因編輯后克隆基因型確認(rèn)
Guide-it Genotype Confirmation Kit |
每個(gè)細(xì)胞中大部分基因都擁有兩個(gè)等位基因。CRISPR/Cas9基因編輯可以對(duì)特定基因的一個(gè)或兩個(gè)等位基因引入插入突變或缺失突變(indels)。Guide-it Genotype Confirmation Kit提供了一種簡(jiǎn)單的方法，用于確認(rèn)特定克隆是一個(gè)等位基因突變（單等位基因），還是兩個(gè)等位基因突變（雙等位基因突變），或者是未發(fā)生變化（野生型）。實(shí)驗(yàn)操作中涉及到從Cas9 和single guide RNA (sgRNA)處理的細(xì)胞中擴(kuò)增靶點(diǎn)序列。擴(kuò)增出的序列被用在重組Cas9和相同的sgRNA的體外剪切反應(yīng)。剪切產(chǎn)物通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳，確定基因型。
基因編輯后使用該試劑盒，加快了在大量克隆中篩選所需基因型的進(jìn)程。每個(gè)試劑盒包含足夠的試劑，用于100次提取、擴(kuò)增和剪切反應(yīng)。 |
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| 產(chǎn)品特點(diǎn)： |
· Cas9 和sgRNA體外剪切實(shí)驗(yàn)，用于確定單等位基因突變和雙等位基因突變
· 包括高純度的重組Cas核酸酶，用于體外剪切實(shí)驗(yàn)
· 流程化的操作步驟，使用來(lái)自于細(xì)胞的目的基因組DNA直接擴(kuò)增
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| 產(chǎn)品應(yīng)用： |
· CRISPR/Cas9 基因編輯
· CRISPR/Cas9 基因編輯后，單等位基因突變和雙等位基因突變的確定 |
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| 實(shí)驗(yàn)例： |
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A圖：使用Cas9和靶向C4BPB 基因的sgRNA對(duì)HEK 293細(xì)胞進(jìn)行基因編輯。使用Guide-it Genotype Confirmation Kit對(duì)獲得的15個(gè)單細(xì)胞克隆進(jìn)行C4BPB位點(diǎn)的基因型鑒定。圖中左側(cè)的野生型 (WT)，單等位基因 (M)，雙等位基因 (B)在分析中作為對(duì)照。結(jié)果表明克隆1，4，10，12是野生型；克隆2是單等位基因突變；以及克隆3，5-9，11和13-15是雙等位基因突變。
B圖：對(duì)A圖中挑選的克隆進(jìn)行測(cè)序分析。每個(gè)結(jié)果中，小寫字母代表的是野生型（WT）序列。對(duì)于那些在A圖中使用基因型鑒定方法確認(rèn)的雙等位基因突變的克隆，進(jìn)一步測(cè)序分析表明克隆7是雜合子，克隆9和11是純合子。在克隆2中，檢測(cè)到3種不同的等位基因，可能是因?yàn)樵贖EK 293細(xì)胞系中出現(xiàn)拷貝數(shù)變異。
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| （數(shù)據(jù)來(lái)源于Takara Bio USA, Inc.） |
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京公網(wǎng)安備 110114000405號(hào)
/編輯效率檢測(cè)（灰）.png)
/細(xì)胞基因型確認(rèn)（黃）.png)
/Indel序列確認(rèn)（灰）.png)
/sgRNA設(shè)計(jì)工具（灰）.png)
/sgRNA合成及篩選（灰）.png)
/CRISPR-Cas9導(dǎo)入方法（灰）.png)
/基因敲入檢測(cè)（灰）.png)
