圖1. 比較Guide-it和Surveyor方法。轉染表達Cas9核酸酶的質粒和特異作用于AAVS1位點的sgRNA至293T細胞,轉染48 hr 后收集細胞,將其與未經轉染的細胞按照不同比例*進行混合,分別進行突變導入檢測。采用Terra PCR Direct Polymerase Mix擴增含有AAVS1位點的目的片段并純化其產物,之后分別采用Guide-it解離酶和Cel1酶(Surveyor assay)進行剪切。采用Guide-it解離酶剪切后條帶清新易于識別,而Surveyor assay剪切后則顯示明顯的彌散,這樣使得不容易測定突變效率并且低水平突變導入很難檢測得到。*泳道1-6 : 100%, 80%, 60%, 40%, 20%, 0%(轉染細胞的比例)
頁面更新:2021-03-11 09:21:22
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