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基因編輯后克隆基因型確認(rèn)
Guide-it Genotype Confirmation Kit |
每個細(xì)胞中大部分基因都擁有兩個等位基因。CRISPR/Cas9基因編輯可以對特定基因的一個或兩個等位基因引入插入突變或缺失突變(indels)。Guide-it Genotype Confirmation Kit提供了一種簡單的方法，用于確認(rèn)特定克隆是一個等位基因突變（單等位基因），還是兩個等位基因突變（雙等位基因突變），或者是未發(fā)生變化（野生型）。實(shí)驗(yàn)操作中涉及到從Cas9 和single guide RNA (sgRNA)處理的細(xì)胞中擴(kuò)增靶點(diǎn)序列。擴(kuò)增出的序列被用在重組Cas9和相同的sgRNA的體外剪切反應(yīng)。剪切產(chǎn)物通過瓊脂糖凝膠電泳，確定基因型。
基因編輯后使用該試劑盒，加快了在大量克隆中篩選所需基因型的進(jìn)程。每個試劑盒包含足夠的試劑，用于100次提取、擴(kuò)增和剪切反應(yīng)。 |
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| 產(chǎn)品特點(diǎn)： |
· Cas9 和sgRNA體外剪切實(shí)驗(yàn)，用于確定單等位基因突變和雙等位基因突變
· 包括高純度的重組Cas核酸酶，用于體外剪切實(shí)驗(yàn)
· 流程化的操作步驟，使用來自于細(xì)胞的目的基因組DNA直接擴(kuò)增
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| 產(chǎn)品應(yīng)用： |
· CRISPR/Cas9 基因編輯
· CRISPR/Cas9 基因編輯后，單等位基因突變和雙等位基因突變的確定 |
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| 實(shí)驗(yàn)例： |
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A圖：使用Cas9和靶向C4BPB 基因的sgRNA對HEK 293細(xì)胞進(jìn)行基因編輯。使用Guide-it Genotype Confirmation Kit對獲得的15個單細(xì)胞克隆進(jìn)行C4BPB位點(diǎn)的基因型鑒定。圖中左側(cè)的野生型 (WT)，單等位基因 (M)，雙等位基因 (B)在分析中作為對照。結(jié)果表明克隆1，4，10，12是野生型；克隆2是單等位基因突變；以及克隆3，5-9，11和13-15是雙等位基因突變。
B圖：對A圖中挑選的克隆進(jìn)行測序分析。每個結(jié)果中，小寫字母代表的是野生型（WT）序列。對于那些在A圖中使用基因型鑒定方法確認(rèn)的雙等位基因突變的克隆，進(jìn)一步測序分析表明克隆7是雜合子，克隆9和11是純合子。在克隆2中，檢測到3種不同的等位基因，可能是因?yàn)樵贖EK 293細(xì)胞系中出現(xiàn)拷貝數(shù)變異。
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| （數(shù)據(jù)來源于Takara Bio USA, Inc.） |
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京公網(wǎng)安備 110114000405號
胞基因型確認(rèn)（黃）.png)
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