| 選對(duì)風(fēng)口扶搖直上，Takara為抗體藥物研發(fā)提供新思路！ |
| 20世紀(jì)70年代，科學(xué)家們將可產(chǎn)生特異性抗體的B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，獲得了可以產(chǎn)生單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞，從而建立了單克隆抗體制備技術(shù)。由于每個(gè)雜交瘤細(xì)胞由一個(gè)B細(xì)胞融合而成，而每個(gè)B細(xì)胞克隆僅識(shí)別一種抗原表位，因此經(jīng)篩選和克隆化的雜交瘤細(xì)胞僅能合成和分泌識(shí)別單一抗原表位的特異性抗體，稱為單克隆抗體。【1】 |
| 單克隆抗體具有高特異性、高活性、良好的藥代動(dòng)力學(xué)特性等特點(diǎn)，因而在癌癥以及神經(jīng)退行性疾病的治療中占據(jù)重要位置。然而如何快速有效的篩選單克隆抗體對(duì)于抗體藥物的研發(fā)是至關(guān)重要的。我們先來(lái)了解一下抗體藥物篩選的流程： |
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| 抗體藥物篩選通常的工作流程包括從B細(xì)胞擴(kuò)增分離可變區(qū)的cDNA，然后將這些區(qū)域克隆到表達(dá)載體或做相應(yīng)的分析以便于下一步應(yīng)用，在表達(dá)后進(jìn)一步純化、篩選表達(dá)的抗體并驗(yàn)證其與靶點(diǎn)的相互作用。 近年來(lái)抗體類藥物行業(yè)發(fā)展迅猛，國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)前景廣闊，毫無(wú)疑問(wèn)是即將起飛的風(fēng)口行業(yè)。 Takara針對(duì)抗體藥物篩選流程中涉及的大量的序列調(diào)取、克隆、表達(dá)以及純化操作，可提供巧妙、高效、快速的方法，為進(jìn)行抗體藥物研發(fā)提供新的思路和解決方案！ |
| SMARTer RACE cDNA合成技術(shù)助力快速分析抗體可變區(qū)序列 |
| 由于抗原抗體結(jié)合的特異性取決于抗體可變區(qū)的特異結(jié)構(gòu)，所以分析可變區(qū)的序列是很多應(yīng)用的第一步，包括用噬菌體展示文庫(kù)篩選單抗以及對(duì)抗體可變區(qū)的優(yōu)化。分析可變區(qū)時(shí)，設(shè)計(jì)一個(gè)通用引物來(lái)擴(kuò)增所有抗體序列是非常困難的，因?yàn)橹劓満洼p鏈5’端的天然可變性決定了序列同源性很低，一個(gè)有效的方法是在可變區(qū)下游的保守區(qū)設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物，后續(xù)使用5’RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)的方法克隆這段目的區(qū)域，之后再進(jìn)行測(cè)序。但普通的RACE方法常有擴(kuò)增序列較短或操作步驟繁瑣的缺點(diǎn)，因此錯(cuò)過(guò)了重要信息。 Takara的SMARTer RACE cDNA合成技術(shù)可為抗體可變區(qū)的全長(zhǎng)序列分析提供簡(jiǎn)單、靈敏、高效的解決方案。SMARTer RACE cDNA擴(kuò)增試劑盒，結(jié)合了Clontech特別的SMARTer（5'末端RNA模板轉(zhuǎn)換機(jī)制）技術(shù)，允許反轉(zhuǎn)錄酶達(dá)到轉(zhuǎn)錄本的5'末端，不需要adaptor連接等步驟，整個(gè)流程更快、更易操作，有效合成全長(zhǎng)cDNA，大大減少了非特異性背景并提高了擴(kuò)增效率。 |
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| In-Fusion方法助力抗體序列的高通量快速克隆 |
| 在抗體藥物研發(fā)的初期，研究人員需要預(yù)測(cè)和篩選大量的抗體藥物靶標(biāo)，進(jìn)而發(fā)現(xiàn)關(guān)鍵的靶點(diǎn)，這少不了抗體基因片段的克隆表達(dá)。你還在苦惱于大片段連接效率低、缺乏方向性以及實(shí)驗(yàn)耗時(shí)長(zhǎng)的傳統(tǒng)酶切連接的克隆方法嗎？Takara的In-Fusion Cloning是一種無(wú)需連接酶、高效率的無(wú)縫克隆技術(shù)，基于載體和插入片段序列之間的同源重組原理，有助于快速、高效地將任意PCR片段克隆到任意目的載體中，背景低，克隆保證方向性，單片段克隆的成功率超過(guò)95％。In-Fusion克隆的快速和易用性以及結(jié)果的正確性，使系統(tǒng)可輕松應(yīng)對(duì)高通量的工作流程。 或許研究某一個(gè)抗體時(shí)，傳統(tǒng)酶切酶連的克隆方法耗時(shí)長(zhǎng)還勉強(qiáng)可以接受。但如果您需要擴(kuò)展至成百上千個(gè)克隆的高通量應(yīng)用時(shí)問(wèn)題就比較嚴(yán)重了，因?yàn)閿U(kuò)大化該工作流程就意味著擴(kuò)大其潛在問(wèn)題和增加了大量的故障排除工作。更何況藥物研發(fā)分秒必爭(zhēng)，既然現(xiàn)在有更加高效的方法，又豈能被輕易拖住腳步？ |
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| Capturem™ Protein A/Protein G系列產(chǎn)品助力抗體的快速高通量純化 |
| 完成抗體的表達(dá)之后，往往離不開(kāi)抗體純化的操作步驟。常規(guī)樹(shù)脂純化方法預(yù)處理和純化時(shí)間長(zhǎng)，柱床體積大，并且對(duì)操作環(huán)境和操作設(shè)備都有較高要求，不便于開(kāi)展大規(guī)模小量樣品的篩選和驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)，往往成為限速步驟，即使是選擇操作較為簡(jiǎn)便、耗時(shí)較短的磁珠純化法，也難免實(shí)驗(yàn)前要對(duì)磁珠進(jìn)行分裝、預(yù)處理，實(shí)驗(yàn)中要進(jìn)行的孵育以及頻繁的移液操作。 明明有了In-Fusion快速高效的克隆方法，卻要在抗體純化上消耗大量人力和時(shí)間，這叫人如何甘心！Takara的Capturem™ Protein A 和Protein G系列產(chǎn)品可以為抗體純化提供快速高通量的解決方案。該系統(tǒng)基于Capturem膜技術(shù)，膜上偶聯(lián)能夠特異性的與IgG的Fc片段結(jié)合的ProteinA或ProteinG，可滿足抗體小量快速純化和96 well大規(guī)?？焖俸Y選，兼具快速、易用、靈活和高產(chǎn)量（與同等體積樹(shù)脂比較）等特點(diǎn)，可以顯著提高抗體純化實(shí)驗(yàn)速度，對(duì)抗體藥物臨床前研發(fā)的進(jìn)程起到推動(dòng)作用！ |
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| Capturem™ Trypsin/Pepsin蛋白質(zhì)快速酶解消化產(chǎn)品助力抗體質(zhì)譜檢測(cè) |
| 使用質(zhì)譜（MS）對(duì)抗體藥物進(jìn)行準(zhǔn)確的定性以及定量已經(jīng)成為抗體藥物研發(fā)過(guò)程中必不可少的環(huán)節(jié)。質(zhì)譜分析中最重要的步驟是樣品制備，需要將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)化為肽。Takara的Capturem™ Trypsin和Capturem™ Pepsin可快速、有效地消化蛋白質(zhì)樣品，在室溫下讓MS工作流程更加連貫。該系列產(chǎn)品應(yīng)用我們的新型Capturem膜技術(shù)，膜上固定有胰蛋白酶（Trypsin）或胃蛋白酶（Pepsin），僅需2-3分鐘的時(shí)間即可高效消化蛋白質(zhì)樣品，能進(jìn)行獨(dú)立樣品酶解，也可進(jìn)行96-well的高通量酶解操作。不僅可以節(jié)省時(shí)間，還可以通過(guò)減少胰蛋白酶自溶來(lái)改善蛋白質(zhì)組學(xué)分析中肽和蛋白質(zhì)的鑒定。 |
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| 伴隨著人類基因組學(xué)及代謝組學(xué)的發(fā)展，越來(lái)越多的單克隆抗體藥物新靶點(diǎn)將被發(fā)現(xiàn)和研究，單克隆抗體藥物的種類未來(lái)也會(huì)繼續(xù)增多！Takara一直助力于單克隆抗體篩選研究，為您抗體藥物篩選工作提供高效、快速的解決方法，是您的新藥研發(fā)工作重要的攻堅(jiān)利器！ |
| 【1】于愛(ài)蓮，王月丹主編；田喜鳳等副主編 ．病原生物與免疫學(xué)．北京：北京大學(xué)醫(yī)學(xué)出版社，2015.06：第316-322頁(yè) |
頁(yè)面更新：2022-01-20 14:32:32
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