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產(chǎn)品選擇指南

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大腸桿菌HB101感受態(tài)細(xì)胞E.coli HB101 Competent Cells
品牌 Code No. 產(chǎn)品名稱 包裝量 價(jià)格（元） 說(shuō)明書(shū) 數(shù)量
Takara 9051 E.coli HB101 Competent Cells 100 μl × 10 ￥457
 
■ 制品內(nèi)容
E.coli HB101 Competent Cells 100 μl × 10
pBR322 plasmid ( 0.1 ng/μl) 10 μl
SOC Medium* 1 ml × 10
*SOC Medium:         2%   Tryptone
 0.5%   Yeast extract
 10 mM   NaCl
 2.5 mM   KCl
  10 mM   MgSO4
  10 mM   MgCl2
 20 mM   Glucose
 
■ 制品說(shuō)明
在Hanahan's method基礎(chǔ)上進(jìn)行了改良，制備出Competent Cells，當(dāng)1 ng pBR322轉(zhuǎn)化100 μl 細(xì)胞時(shí)，轉(zhuǎn)化效率>1×108 cfu/μg。
E.coli HB101 Competent Cells 可用來(lái)制作DNA文庫(kù)或重組質(zhì)粒的亞克隆。
 
■ 細(xì)胞濃度
1-2×109 bacteria/ml
 
■ Genotype
E. coli HB101:
F-, hsd S 20(rB-, mB-), recA13, ara-14, proA2, lacY1, galK2, rpsL20 (str), xyl-5, mtl-1,supE44, leuB6, thi-1.
 
■ 保存
-80℃。
注意： 如果不在-80℃下保存，轉(zhuǎn)化效率將會(huì)降低。此時(shí)，在使用前，請(qǐng)使用附帶的pBR332對(duì)照質(zhì)粒來(lái)確認(rèn)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。不能液氮保存。
 
■ 轉(zhuǎn)化效率
轉(zhuǎn)入1 ng 的pBR322，涂于含有Amp+ 的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。
轉(zhuǎn)化效率 : >1 x 108 cfu/μg pBR322
 
■ 注意事項(xiàng)
1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80℃冷凍取出后請(qǐng)立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。
2. 對(duì)于轉(zhuǎn)化，可以使用1.5 ml微量離心管代替14 ml圓底管（BD Code：352059或352057等），
   但轉(zhuǎn)化效率可能會(huì)降低。
3. 當(dāng)使用100 μl感受態(tài)細(xì)胞時(shí)，加入不超過(guò)10 ng的高純度DNA樣品。否則轉(zhuǎn)化效率會(huì)降低。
4. 當(dāng)改變實(shí)驗(yàn)規(guī)模時(shí)，適當(dāng)改變反應(yīng)條件。
5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培養(yǎng)基。此時(shí)，轉(zhuǎn)化效率可能會(huì)降低。
    ·L-broth : Ingredient per liter water  
  Tryptone 10 g  
  Yyeast extract 5 g  
  NaCl 5 g  
    用1 N NaOH調(diào)整pH到7.5并高壓滅菌。
    ·φ b-broth : Ingredient per liter water  
  Ttryptone 20 g  
  Yeast extract 5 g  
  MgSO4·7H2O 5 g  
    用1 N KOH調(diào)整pH到7.5并高壓滅菌。
6. 稀釋轉(zhuǎn)化混合物時(shí)，使用“使用方法”中步驟7中添加的培養(yǎng)基。
7. 一旦感受態(tài)細(xì)胞解凍，不建議重新冷凍儲(chǔ)存。 如果不可避免，應(yīng)用干冰/乙醇快速冷凍細(xì)胞，
   并在-80℃下迅速保存。但是，轉(zhuǎn)化效率將會(huì)降低 。
 

頁(yè)面更新：2024-01-25 16:27:59

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