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產(chǎn)品選擇指南

技術(shù)服務(wù)信息

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長(zhǎng)片段RT-PCR試劑盒TaKaRa RNA LA PCR™ Kit (AMV) Ver.1.1
品牌 Code No. 產(chǎn)品名稱 包裝量 價(jià)格（元） 說(shuō)明書(shū) 數(shù)量
Takara RR012A TaKaRa RNA LA PCR™ Kit (AMV) Ver.1.1 100 Rxns ￥3,952
無(wú)標(biāo)題文檔
※ 上表中產(chǎn)品貨期不定，請(qǐng)您在下單前咨詢當(dāng)?shù)卮砩獭?/STRONG>
 
 
RNA提取試劑 RT-pcr試劑 DNA Markers PCR儀器
 
 
■ 制品內(nèi)容 (100 次量*1)
AMV Reverse Transcriptase XL (5 U/μl) (來(lái)源于Avian Myeloblastosis Virus) 50 μl
RNase Inhibitor*2 (40 U/μl) 25 μl
Random 9 mers*2 (50 pmol/μl) 50 μl
Oligo dT-Adaptor Primer (2.5 pmol/μl) 50 μl
RNase Free dH2O 1 ml
TaKaRa LA Taq (5 U/μl) 25 μl
M13 Primer M4*2 (20 pmol/μl) 50 μl
10X RNA PCR Buffer 120 μl
    100 mM Tris-HCl (pH8.3)  
    500 mM KCl  
10X LA PCR Buffer II (Mg2+ Free) 500 μl
dNTP Mixture (各10 mM) 150 μl
MgCl2 (25 mM) 1 ml
Control F-1 Primer*2 (20 pmol/μl) (Positive Control RNA下游引物) 25 μl
Control R-1 Primer*2 (20 pmol/μl) (Positive Control RNA上游引物) 25 μl
Positive Control RNA*2 (2 × 105 copies/μl)
(Transcribed poly(A)+ RNA of pSPTet3 plasmid)		 25 μl
 
*1：本試劑盒可用于100次反應(yīng) (總反應(yīng)量：RT 反應(yīng)10 μl, PCR反應(yīng) 50 μl)
*2：【各種引物序列】
 
引物名稱 各引物序列
Random 9 mers
        5′-NNNNNNNNN-3′
Oligo dT-Adaptor Primer
        包含dT區(qū)域及M13 Primer M4序列。
Control F-1 Primer
        5′-CTGCTCGCTTCGCTACTTGGA-3′
Control R-1 Primer
        5′-CGGCACCTGTCCTACGAGTTG-3′
M13 Primer M4
        5′-GTTTTCCCAGTCACGAC-3′
 
*3：【Positive Control RNA】
本試劑盒中的Control RNA是以pSPTet3質(zhì)粒 (質(zhì)粒中的SP6啟動(dòng)子下游插入長(zhǎng)約1.4 kbp的pBR322來(lái)源的DNA片段，其DNA片段上含有抗四環(huán)素基因) 為模板由SP6 RNA聚合酶經(jīng)體外轉(zhuǎn)錄而得到的。Control RNA (約1.4 kb) 是帶有30個(gè)A堿基的具有Poly(A)+ 尾的RNA。當(dāng)把Control RNA經(jīng)RT-PCR合成的雙鏈cDNA插入質(zhì)粒時(shí)，該質(zhì)粒便可獲得四環(huán)素抗性。Control RNA簡(jiǎn)圖見(jiàn)圖1。
 
圖1. Positive Control RNA：使用各種引物所能擴(kuò)增的DNA片段
 
 
■ 制品說(shuō)明
TaKaRa RNA LA PCR Kit (AMV) Ver.1.1使用TaKaRa LA Taq酶，實(shí)現(xiàn)反轉(zhuǎn)錄后的更長(zhǎng)更準(zhǔn)確的PCR反應(yīng)。TaKaRa LA Taq酶是Takara Bio公司研制的LA (long and accurate) PCR*反應(yīng)的關(guān)鍵組成。
本試劑盒利用LA Technology的優(yōu)勢(shì)特點(diǎn)，用AMV (Avian Myeloblastosis Virus) 來(lái)源的反轉(zhuǎn)錄酶，由RNA反轉(zhuǎn)錄至cDNA，然后再在同一反應(yīng)管中用TaKaRa LA Taq擴(kuò)增此cDNA，操作簡(jiǎn)單，使用方便。本試劑盒中的Oligo dT-Adaptor Primer的特別設(shè)計(jì)，使從Poly (A)+ RNA 3’端合成cDNA的效率更高，從而可以利用3’-RACE法高效擴(kuò)增RNA的3′端未知區(qū)域。
*：U.S.Patent 5,436,149 for LA Technology is owned by TAKARA BIO INC.
 
■ 保存
-20℃。
 
■ 特點(diǎn)
RNA模板
   適用于所有RNA
擴(kuò)增片段大小
   ～12 kb
反轉(zhuǎn)錄酶
   AMV Reverse Transcriptase (反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)溫度在42℃～60℃)
DNA Polymerase
   TaKaRa LA Taq
RNase Inhibitor
   試劑盒中含有
合成cDNA第一條鏈的引物
   Random 9 mers或Oligo dT-Adaptor Primer或特異性下游PCR Primer 可供選擇
3′-RACE法
  RT反應(yīng)時(shí)使用Oligo dT-Adaptor Primer
  PCR反應(yīng)時(shí)下游引物使用M13 Primer M4
操 作
   在同一反應(yīng)管中進(jìn)行 (反轉(zhuǎn)錄酶在進(jìn)行PCR反應(yīng)前須進(jìn)行高溫失活)
 
■ 使用注意
1. 當(dāng)同時(shí)需要進(jìn)行多個(gè)反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)或PCR反應(yīng)時(shí)，應(yīng)先配制各種試劑的混合液 (其中包括RNase Free dH2O、Buffer、dNTP Mixture、MgCl2等），然后再分裝到每個(gè)反應(yīng)管中。這樣，可使所取的試劑體積更準(zhǔn)確，減少試劑損失，避免重復(fù)分取同一試劑。同時(shí)也可以減少實(shí)驗(yàn)操作或?qū)嶒?yàn)之間產(chǎn)生的誤差。
2. 使用Reverse Transcriptase (AMV)、RNase Inhibitor、TaKaRa LA Taq 等試劑時(shí)，應(yīng)輕輕混勻，避免起泡；分取之前要小心地離心收集到反應(yīng)管底部；由于酶保存液中含有50%的甘油，粘度高，分取時(shí)應(yīng)慢慢吸取。
3. 酶制品應(yīng)在實(shí)驗(yàn)前才從-20℃中取出，使用后也應(yīng)立即放回-20℃中保存。
4. 分裝試劑時(shí)務(wù)必使用新的槍頭，以防止樣品間污染。
5. PCR反應(yīng)條件
最適的PCR條件因PCR擴(kuò)增儀的不同而不同，建議在進(jìn)行樣品實(shí)驗(yàn)前先試做一下Control實(shí)驗(yàn)。
6. 引物選擇
用于反轉(zhuǎn)錄的引物可視實(shí)驗(yàn)具體情況選擇Random 9 mers、Oligo dT-Adaptor Primer或特異性下游引物。對(duì)于不具有Hairpin構(gòu)造的短鏈mRNA，3種引物中的任何一種都可以使用，但一般應(yīng)按以下方法進(jìn)行選擇。
Random 9 mers
  適用于長(zhǎng)的或具有Hairpin構(gòu)造的RNA。包括rRNA、mRNA、tRNA等在內(nèi)的所有RNA的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)都可使用本引物。
  用Random 9 mers合成的cDNA進(jìn)行PCR反應(yīng)時(shí)，使用任何一對(duì)特異性引物都能獲得良好的擴(kuò)增。
Oligo dT-AdaptorPrimer
   適用于具有Poly(A)+ Tail的RNA。(注意：原核生物的RNA、真核生物Primer 的rRNA及tRNA以及某些種類的真核生物的mRNA不具有Poly(A)+ Tail)。本Primer設(shè)計(jì)巧妙，反轉(zhuǎn)錄效率高。反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)后，可用M13 Primer M4進(jìn)行3’-RACE實(shí)驗(yàn)。
特異性下游PCR Primer
(PCR時(shí)的下游引物)
  因其必須與模板序列互補(bǔ)，所以只適用于Target序列已知的情況。
 
 

頁(yè)面更新：2023-11-01 16:23:15

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