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機(jī)構(gòu)用戶解決方案

產(chǎn)品選擇指南

技術(shù)服務(wù)信息

當(dāng)前位置:首頁(yè) > T細(xì)胞治療研究解決方案 > RNA-Seq(SMARTer法)

 
T細(xì)胞治療研究解決方案
 
使用轉(zhuǎn)基因T細(xì)胞(T淋巴細(xì)胞)來(lái)靶向治療癌癥是一種很有前景的方法,特別是對(duì)于難以使用傳統(tǒng)方法來(lái)治療的癌癥。最為常見(jiàn)的兩種方法圍繞著在基因工程T細(xì)胞中引入新的T細(xì)胞受體(TCR)或嵌合抗原受體(CAR)(Humphries 2013)來(lái)開(kāi)展。
過(guò)繼性T細(xì)胞療法的工作流程主要包括以下幾大步:從病人體內(nèi)分離T細(xì)胞,在體外對(duì)這些T細(xì)胞進(jìn)行基因改造,然后將改造后的T細(xì)胞回輸至病人體內(nèi)。除了這種被稱作自體同源的方法之外,全世界的一些公司正致力于開(kāi)發(fā)一種可以從單一供體生產(chǎn),然后用于治療數(shù)千名患者(異體同源方法)的治療方法。在這兩種方法中,T細(xì)胞改造都是在患者體外進(jìn)行的(體外基因治療)。在T細(xì)胞改造方面,Takara可以為您提供較為完善的解決方案,助力T細(xì)胞治療研究
 
 
 
1. TCR/scFv調(diào)?。篠MARTer RACE 5’/3’ Kit
 
SMARTer RACE 5’/3’Kit使用SMARTer技術(shù)進(jìn)行RACE (Rapid amplification of cDNA ends),無(wú)需接頭連接即可合成cDNA。所合成的cDNA可直接用于5’ RACE PCR或者3’ RACE PCR,因此抗體可變區(qū)等可通過(guò)簡(jiǎn)便的操作流程來(lái)進(jìn)行克隆。該方法已在T細(xì)胞治療中有所應(yīng)用,并且在T細(xì)胞/B細(xì)胞相關(guān)研究中的使用頻率也越來(lái)越高。
 
· Dossa RG., et al. (2018) Development of T-cell immunotherapy for hematopoietic stem cell
   transplantation recipients at risk of leukemia relapse. Blood. 131(1):108-120.
· Arai Y., et al. (2018) Myeloid Conditioning with c-kit-Targeted CAR-T Cells Enables Donor Stem
   Cell Engraftment. Mol Ther. 26(5):1181-1197.
· Su S., et al. (2017) Blocking the recruitment of naive CD4+ T cells reverses immunosuppression
   in breast cancer. Cell Res. 27(4):461-482.
· Benjamin Y. Jin, et al. (2018) Engineered T cells targeting E7 mediate regression of human
   papillomavirus cancers in a murine model. JCI Insight. 2018 Apr 19; 3(8): e99488.
 
2. CAR/TCR載體構(gòu)建:In-Fusion HD Cloning Plus
 
In-Fusion HD Cloning Plus技術(shù)通過(guò)加速抗原及CAR載體的構(gòu)建,加速了T細(xì)胞基因改造流程。In-Fusion HD克?。嚎焖?(15 min), 高效(克隆效率>95%), 無(wú)序列依賴 (任何PCR插入片段都可以克隆到任意載體的任意位點(diǎn)), 無(wú)縫(靶標(biāo)抗體不會(huì)加入任何額外堿基對(duì)或者氨基酸), 定向, 高通量(HTP)。
由于高克隆效率和高準(zhǔn)確度,多項(xiàng)研究中使用In-Fusion HD 克隆技術(shù)進(jìn)行抗體片段高通量克隆(Spidel et al. 2016; Chen et al. 2014; Meng et al. 2015)。
 
· Yi Z., et al. (2018) Optimizing EphA2-CAR T Cells for the Adoptive Immunotherapy of Glioma.
   Mol Ther Methods Clin Dev. 2018 Feb 2;9:70-80.
· Hale M., et al. (2017) Homology-Directed Recombination for Enhanced Engineering of Chimeric
   Antigen Receptor T Cells. Mol Ther Methods Clin Dev. 2017 Jan 10;4:192-203.
· Shum T., et al. (2017) Constitutive Signaling from an Engineered IL7 Receptor Promotes Durable
   Tumor Elimination by Tumor-Redirected T Cells. Cancer Discov. 2017 Nov;7(11):1238-1247.
· Tashiro H., et al. (2017) Treatment of Acute Myeloid Leukemia with T Cells Expressing Chimeric
   Antigen Receptors Directed to C-type Lectin-like Molecule 1. Mol Ther. 2017 Sep 6;25(9):2202
   -2213.
 
 
3. 慢病毒成功轉(zhuǎn)導(dǎo):Lenti-X Titration and Concentrator kits
 
目前有多種載體用于TCR-T/CAR-T細(xì)胞制備,已開(kāi)展的臨床試驗(yàn)以病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)的方式為主,而以非病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)的方式也逐漸受到青睞。
合適的病毒滴度是慢病毒成功轉(zhuǎn)導(dǎo)的關(guān)鍵因素。Lenti-X Titration kits可提供p24 ELISA、qRT-PCR和GoStix三種慢病毒滴度測(cè)定方法,耗時(shí)僅需4小時(shí)-10分鐘,更為快速高效,輕松加速T細(xì)胞制備;Lenti-X Concentrator可輕松濃縮慢病毒滴度,不需要特殊設(shè)備。
 
4. 增強(qiáng)慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)T細(xì)胞:GMP Grade RetroNectin
 
在過(guò)繼性T細(xì)胞療法中,為了有效地將TCR / CAR基因引入T淋巴細(xì)胞中,高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率是至關(guān)重要的。RetroNectin GMP級(jí)試劑可用于增強(qiáng)病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)和擴(kuò)增幼稚T細(xì)胞群,該產(chǎn)品已在全球44個(gè)機(jī)構(gòu)中用于超過(guò)68種基因治療臨床試驗(yàn)方案。
美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院Steven Rosenberg博士研究組、紀(jì)念斯隆凱特琳癌癥中心、日本三重大學(xué)醫(yī)院在進(jìn)行相關(guān)疾病臨床研究過(guò)程中,都使用了RetroNectin GMP級(jí)試劑進(jìn)行了T細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo),眾多其它臨床研究使用文章也已發(fā)表。
 
5. CRISPR/Cas9基因編輯:Guide-it Gene editing products
 
CRISPR/Cas9基因組編輯是其中一種非病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)方式,在癌癥免疫治療中已展示出了令人樂(lè)觀的結(jié)果,可用于破壞癌癥細(xì)胞免疫逃逸機(jī)制。Kagoya et al., 2018報(bào)道抑制DOT1L可減輕異體T細(xì)胞反應(yīng)。在這篇文章中作者使用Guide-it sgRNA In Vitro Transcription KitGuide-it Recombinant Cas9制備了Cas9-sgRNA核糖核蛋白(RNP)復(fù)合物,通過(guò)電轉(zhuǎn)RNP復(fù)合物的方式,敲除了CAR-T細(xì)胞中的若干內(nèi)源性TCRs,其敲除效率可達(dá)到~30%。
 
 
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主講人:Theo Roth,MD/PhD student at UCSF
 
 
6. T細(xì)胞受體NGS分析:SMARTer immune profiling kits
 
免疫基因組學(xué)應(yīng)用于癌癥研究的一個(gè)挑戰(zhàn)就是在癌癥患者接受免疫治療之前和之后,確定T細(xì)胞庫(kù)并鑒定腫瘤反應(yīng)性T細(xì)胞克隆 (Liu et al. 2017)。SMARTer immune profiling kits利用SMART技術(shù)和基于5'-RACE的方法來(lái)捕獲TCR轉(zhuǎn)錄本完整V(D)J可變區(qū),提供批量細(xì)胞、單細(xì)胞及高通量單細(xì)胞等多種T細(xì)胞受體(TCR)的NGS分析解決方案。
 
· SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit v2
   以總RNA或純化后細(xì)胞為起始進(jìn)行分析。
· SMARTer Human scTCR a/b Profiling Kit
   可以完全捕獲TCR-α和TCR-β可變區(qū),
   確定單個(gè)T細(xì)胞內(nèi)TCR α/β鏈配對(duì)信息。
· SMARTer ICELL8 human TCR a/b profiling
   可在高通量單細(xì)胞平臺(tái)SMARTer ICELL8 cx
   系統(tǒng)上輕松捕獲TCR轉(zhuǎn)錄本完整V(D)J可變區(qū)。
 
 
 
 
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