本制品是應(yīng)用LA PCR原理研制的具有3′→5′Exonuclease活性 (Proof reading活性) 的耐熱性DNA聚合酶。無(wú)論是擴(kuò)增短鏈DNA還是長(zhǎng)鏈DNA,其效率都優(yōu)于其它同類產(chǎn)品,尤其在擴(kuò)增大于10 kb的DNA片段方面,其優(yōu)勢(shì)更加明顯,而且保真性能強(qiáng)。當(dāng)擴(kuò)增具有復(fù)雜的二級(jí)結(jié)構(gòu) (GC rich等) 的模板或具有重復(fù)序列的模板時(shí),使用GC Buffer進(jìn)行PCR擴(kuò)增將非常有效。GC Buffer可以單獨(dú)購(gòu)買。 |
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預(yù)變性說明如下:
※ 當(dāng)對(duì)長(zhǎng)片段或富含GC序列等復(fù)雜的模板進(jìn)行擴(kuò)增時(shí),如有必要,可進(jìn)行94℃ 1 min的預(yù)變性處理 (過度熱處理可能會(huì)導(dǎo)致PCR酶失活)。 |
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■ 保存 |
-20℃。
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■ 活性定義 |
用活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物,在74℃,30分鐘內(nèi),攝入10 nmol的全核苷酸為酸性不溶物的活性定義為1個(gè)活性單位 (U)。
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■ 純度 |
25 U的本酶和1 μg的Supercoiled pBR322 DNA在74℃下反應(yīng)1小時(shí),未檢出內(nèi)切酶和外切酶活性。
25 U的本酶和1 μg的λ-Hind III、或1 μg的λ DNA在74℃下反應(yīng)16小時(shí),均未檢出內(nèi)切酶和外切酶活性。
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■ PCR產(chǎn)物 |
使用本制品擴(kuò)增得到的大部分PCR產(chǎn)物3’端附有一個(gè)“A” 堿基,因此可直接克隆于T-Vector中。但克隆片段過長(zhǎng) (大于5 kb),TA克隆效率將會(huì)降低。也可以將PCR產(chǎn)物進(jìn)行末端平滑化和磷酸化后克隆到平滑末端載體中。
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