本制品是應(yīng)用LA PCR原理研制的具有3′→5′Exonuclease活性 (Proof reading活性) 的耐熱性DNA聚合酶。無論是擴增短鏈DNA還是長鏈DNA,其效率都優(yōu)于其它同類產(chǎn)品,尤其在擴增大于10 kb的DNA片段方面,其優(yōu)勢更加明顯,而且保真性能強。當(dāng)擴增具有復(fù)雜的二級結(jié)構(gòu) (GC rich等) 的模板或具有重復(fù)序列的模板時,使用GC Buffer進行PCR擴增將非常有效。GC Buffer可以單獨購買。 |
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預(yù)變性說明如下:
※ 當(dāng)對長片段或富含GC序列等復(fù)雜的模板進行擴增時,如有必要,可進行94℃ 1 min的預(yù)變性處理 (過度熱處理可能會導(dǎo)致PCR酶失活)。 |
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■ 保存 |
-20℃。
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■ 活性定義 |
用活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物,在74℃,30分鐘內(nèi),攝入10 nmol的全核苷酸為酸性不溶物的活性定義為1個活性單位 (U)。
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■ 純度 |
25 U的本酶和1 μg的Supercoiled pBR322 DNA在74℃下反應(yīng)1小時,未檢出內(nèi)切酶和外切酶活性。
25 U的本酶和1 μg的λ-Hind III、或1 μg的λ DNA在74℃下反應(yīng)16小時,均未檢出內(nèi)切酶和外切酶活性。
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■ PCR產(chǎn)物 |
使用本制品擴增得到的大部分PCR產(chǎn)物3’端附有一個“A” 堿基,因此可直接克隆于T-Vector中。但克隆片段過長 (大于5 kb),TA克隆效率將會降低。也可以將PCR產(chǎn)物進行末端平滑化和磷酸化后克隆到平滑末端載體中。
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